1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内完全解冻,使细胞能尽快通过易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
6)**天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
以下是小鼠胚胎成纤维细胞;NIH/3T3图片产品信息的认购信息:
细胞名称 小鼠胚胎成纤维细胞;NIH/3T3图片
形态特性 成纤维细胞样
生长特性 贴壁生长
特征特性 NIH/3T3是从NIH Swiss小鼠胚胎培养物中建立的高度接触性抑制的连续传代细胞株。为了培育在形态学特征上更适合于进行转化分析的亚株,建立的NIH/3T3细胞株又进行了5轮以上亚克隆。该细胞株对肉瘤病毒的转化灶形成和白血病病毒的繁殖高度敏感,对DNA转化及转染研究十分有用。鼠痘病毒阴性。
培养条件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS
传代方法 1:3传代,2-3天传一代
传代情况 C84
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 阴性
STR STR鉴定
同工酶
染色体
注意事项:
1. 小鼠胚胎成纤维细胞;NIH/3T3图片接收到细胞,肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张)。
2.用75%的酒精(建议配置75%的酒精的水是过的)。
3.严格无菌操作,打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出(严禁直接倾倒),放入另一无菌容器中(建议换新的培养基培养细胞)。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆,轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落,加入终止液终止。
6.1000rpm,5min离心,重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶,37℃,5%CO2培养。
细胞培养的优点:
1.小鼠胚胎成纤维细胞;NIH/3T3图片研究的对象是活细胞
在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备
记录方式可采用摄影照片、缩时电影、电视等多种手段。
5.研究的范围比较广泛
应用的学科领域较为宽广,如细胞学、学、肿瘤学、生物化学、遗传学、分子生物学等;
适用的对象范围广,从低等动物到高等动物,一种动物的不同年龄阶段以及不同组织,都可进行有针对性的研究。
6.研究的费用相对较经济
可提供大量、同一时期、重复性好的、生物学性状相似的实验对象。
以下是小鼠胚胎成纤维细胞;NIH/3T3图片的相关产品,点击进入了解更多人正常组织来源细胞。
TFDP2/DP2 转录因子E2F二聚体蛋白2抗体 规格: 0.2ml
Phospho-Tuberin/TSC2(Ser540) 磷酸化结节性硬化蛋白抗体 规格: 0.1mlMAPK organizer 1/Morg1 丝裂原活化蛋白激酶组织蛋白1抗体 规格: 0.1ml
CREG2 E1A激活基因刺激蛋白2抗体 规格: 0.2ml
phospho-MEK3(Thr222) 磷酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶3抗体 规格: 0.1ml
SERBP1 纤溶酶原激活物抑制剂1 RNA结合蛋白抗体 规格: 0.2ml
phospho-P53(Thr55) 磷酸化瘤抑制基因P53抗体 规格: 0.1ml
C1QL2/C1QTNF10 补体C1q和瘤坏死因子相关蛋白10 规格: 0.2mlPELO PELO蛋白抗体 规格: 0.2ml
REG1β/REG1 beta 胰岛细因子β抗体 规格: 0.2mlASAM/ACAM 脂肪细胞特异性粘附分子抗体 规格: 0.1ml
Rabbit Anti-chicken IgG/Cy7 Cy7标记的兔抗鸡IgG 规格: 0.1ml
Rabbit anti-mouse Kappa light chain/HRP 辣根过氧化物酶标记的兔抗小鼠k链 规格: 0.1ml
BMP5 骨形态发生蛋白5抗体 规格: 0.1mlATH III 抗凝酶3抗体 规格: 0.2ml
小鼠胚胎成纤维细胞;NIH/3T3图片熊果酸乙酸酯;Acetylursolic CAS号: 7372-30-7 规格: 20mg 订购|咨询
赖氨酸;L-Lysine CAS号: 56-87-1 规格: 20mg 订购|咨询
硫酸软骨素;Chondroitin 4- CAS号: 24967-93-9 规格: 30mg 订购|咨询
腺苷;Adenosine CAS号: 58-61-7 规格: 20mg 订购|咨询
白杨素;Chrysin CAS号: 480-40-0 规格: 20mg 订购|咨询
异桑叶生物碱 CAS号: 169105-89-9 规格: HPLC≥98%;20mg 订购|咨询
七叶胆苷IX CAS号: 规格: HPLC≥98%;20mg 订购|咨询
白芷属脑 CAS号: 31575-93-6 规格: HPLC≥98%;20mg 订购|咨询
羽扇豆醇 CAS号: 545-47-1 规格: HPLC≥98%;20mg 订购|咨询
酸枣仁皂苷B;Jujuboside B CAS号: 55466-05-2 规格: 20mg 订购|咨询
刺桐碱 CAS号: 487-58-1 规格: HPLC≥98%;20mg 订购|咨询