1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内完全解冻，使细胞能尽快通过易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）**天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
以下是新生牛眼Tenon＇s囊成纤维细胞；NBTF图片产品信息的认购信息：
细胞名称 新生牛眼Tenon＇s囊成纤维细胞；NBTF图片
形态特性 成纤维细胞样
生长特性 贴壁生长
特征特性 北京眼科研究所建系细胞。
培养条件 DMEM-H: Dulbecco＇s Modified Eagle＇s Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 10%FBS
传代方法 1:2~1:3传代；3~4天1次。
传代情况 不详
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 培养法（-）
STR -
同工酶
染色体
注意事项：
1. 新生牛眼Tenon＇s囊成纤维细胞；NBTF图片接收到细胞，肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张）。
2.用75%的酒精（建议配置75%的酒精的水是过的）。
3.严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
6.1000rpm，5min离心，重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶，37℃，5%CO2培养。
细胞培养的优点：
1.新生牛眼Tenon＇s囊成纤维细胞；NBTF图片研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备
记录方式可采用摄影照片、缩时电影、电视等多种手段。
5.研究的范围比较广泛
应用的学科领域较为宽广，如细胞学、学、肿瘤学、生物化学、遗传学、分子生物学等；
适用的对象范围广，从低等动物到高等动物，一种动物的不同年龄阶段以及不同组织，都可进行有针对性的研究。
6.研究的费用相对较经济
可提供大量、同一时期、重复性好的、生物学性状相似的实验对象。
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PSB（磷酸盐缓冲液pH7.2） 9ml*20支/包
改良马丁液体培养基 250ml*20瓶
大豆酪蛋白消化物培养基（USP）颗粒 Soybean Casein Digest Medium 250g
DRBC琼脂 DRBC Agar 250g
Andrade氏糖类肉汤 Andrade’s Carbohydrate Broth 250g
复方中和剂管（带棉签） 10ml*20
放线菌酮 cycloheximide 11.25mg/支*5
D-核糖-双岐杆菌鉴定 20支
副溶血性弧菌琼脂 Vibrio parahaemolyticus agar 250g
琼脂培养基O Agar medium O(Baird-Parker agar) 250g
四硫磺酸盐煌绿增菌液（TTB肉汤） TTB Broth 10ml*20支/包
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石吊兰 英文名称：Shi Diaolan 规格：：2g 保存：：-20℃，避光
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蒺藜 英文名称：Tribulus terrestris 规格：：3g 保存：：-20℃，避光
总RNA提取试剂盒 100T 盒
新生牛眼Tenon＇s囊成纤维细胞；NBTF图片薯莨 英文名称：Dioscorea cirrhosa 规格：：0.2g 保存：：-20℃，避光
兔抗Avidin-FITC 0.5ml 支
石椒草 英文名称：Shi Jiaocao 规格：：1g 保存：：-20℃，避光
4％多聚甲醛 100ml 瓶
半枝莲 英文名称：Scutellaria barbata 规格：：1g 保存：：-20℃，避光
Leupeptin 亮抑酶肽 2mg 瓶
透骨香 英文名称：Gaultheria yunnanensis. 规格：：2g 保存：：-20℃，避光
结晶紫染色液(0.1%) 100ml 瓶
土大黄 英文名称：Tu Dahuang 规格：：1g 保存：：-20℃，避光