荧光定量PCR试剂盒制造技术:
产品仅用于科研本实用新型技术公开了一种实时荧光定量PCR试剂盒,包括盒体,盒体由上盒体和下盒体组成,上盒体的底面上设有限位凸起,下盒体的顶面上设有与限位凸起匹配的凹槽,且在下盒体左右侧壁的下端均软连接有侧盖,侧盖远离下盒体的一端连接有卡勾,下盒体的上端边缘处设有环形凸起,两个卡勾分别勾住环形凸起的左右两端将上盒体固定在下盒体上;凹槽的内部设有固定杆,固定杆上通过转动件转动连接有用于放置试管的试管架;下盒体的左右两侧均设置有收纳槽。本实用新型技术通过将盒体分为上下组合的两个部分,并将两个部分通过侧盖连接,即可保证试剂盒的便携性,同时使用试剂盒自带的试管可提高检测的效率。
设计原则:
1、引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。2、 产物不能形成二级结构。
3、引物长度一般在15~30碱基之间。
4、G+C含量在40%~60%之间。
5、碱基要随机分布。
6、引物自身不能有连续4个碱基的互补。
7、引物之间不能有连续4个碱基的互补。
8、引物5′端可以修饰。
9、引物3′端不可修饰。
10、引物3′端要避开密码子的第3位。
PCR引物设计的目的是找到一对合适的核苷酸片段,使其能有效地扩增模板DNA序列。如前述,引物的优劣直接关系到PCR的特异性与成功与否。对引物的设计不可能有一种包罗万象的规则确保PCR的成功,但遵循某些原则,则有助于引物的设计。
产品名称
2019-nCoV科研N基因探针法荧光定量RT-PCR试剂盒
规格
50只/套
货号
CP925072
使用方法:
1. 标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 专用模板稀释液,好用带芯枪头,下同)。
3. 在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照(浓度为 1×10E8 拷贝/μL,试剂盒提供),充分震荡 1 分钟,得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备
7. 用自选方法纯化样品的 DNA,本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
8. 如果有 N 个样品,则需要进行 N+2 个样品提取,多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。
三、设置 qPCR 反应(20μL 体系,在样品制备室进行)
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复,则标记 N+9 个 PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照(用水做模板),6 个用于标准曲
线。如果做定性分析,并且只做 1 次重复,则标记 N+4 个 PCR 管,其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品,1 个用于 PCR 阴性对照(用水做模板),1 个用于PCR 阳性对照(步稀释得到的标准曲线系列稀释液的第 4 号做模板)。下面只以定量分析为例描述操作骤。
1. 特异性:所有产品使用的引物均经过详尽的生物信息学分析,经过及自建庞大数据库的比对,确保所用的每一条引物均为种属或血清型特异的基因序列区段,可实现对种属及血清型的特异检测,特异性均达到100%。
2. 重现性:该系列所有产品均经过大量实验菌株的验证,重现性为100%。
3. 灵敏性:该系列产品可实现对检测菌的高灵敏检测,当样品中的浓度达到103cfu/ml时,可实现对其的直接检测,无需繁琐的增菌过程。
4. 实用性:检测范围广,涵盖了对人体危害较为严重的17种呼吸道及肠道致病菌,可实现对临床样品及其他环境取样的快速检测,整个检测过程为3-4个小时。
5. 优势1:序列资源丰富,除公布的序列外,公司还进行了大量菌株的序列破译,从理论上保证所选引物具有良好的保守性和特异性
6. 优势2:该系列试剂盒均经过大量的保守性及特异性实验验证,凭借公司拥有的丰富的菌种资源,每一种检测试剂盒均经过了20余种标准菌株和临床菌株的保守性验证及40余种近缘标准菌株和临床菌株的特异性验证,确保在使用过程中不会出现任何的假阳性及假阴性报告结果。
phospho-MEF2C(Thr300) 磷肌细胞增强因子2C抗体 特价促销 0.1ml 2,6-Dibromoanthraquinone
Megsin 丝蛋白酶抑制剂B7抗体 特价促销 0.2ml 2,7-Dibromofluorene
MEF2D 肌细胞特异性增强因子2D抗体 特价促销 0.2ml 2,7-Dibromo-9-fluorenone
phospho-MEF2D(Ser180) 磷肌细胞特异性增强因子2D抗体 特价促销 0.1ml 2,7-Dibromonaphthalene
phospho-MEF2D(Ser444) 磷肌细胞特异性增强因子2D抗体 特价促销 0.1ml 2,7-Dibromo-9,9'-spirobi[9H-fluorene]
Melamine 三聚抗体 特价促销 0.2ml 4,7-Dibromo-2,1,3-benzothiadiazole
Melamine 三聚抗体 特价促销 0.2ml 2,7-Dibromo-9,9-dimethylfluorene
Melanoma HMB45/Melanoma/Melan-A/MART-1 黑色素瘤相关抗原/黑色素-A抗体 特价促销 0.1ml 2,2'-Dibromo-9,9'-spirobi[9H-fluorene]
依替膦相关物质A标准品 规格:300mg 英文名称:Etidronate Disodium
氢甲噻标准品 规格:200mg 英文名称:Hydroflumethiazide
甲噻嗪标准品 规格:200mg 英文名称:Methyclothiazide
瑞格列奈标准品 规格:200mg 英文名称:Repaglinide
安非拉盐盐标准品 规格:200mg 英文名称:
拉米夫定标准品 规格:200mg 英文名称:Lamivudine
二氧钛标准品 规格:1g 英文名称:Titanium Dioxide (AS)
避蚊标准品 规格:3g 英文名称:Diethyltoluamide
托卡朋相关物质B标准品 规格:25mg 英文名称:Tolcapone Related Compound B
乙相关物质B标准品 规格:15mg 英文名称:
2019-nCoV科研N基因探针法荧光定量RT-PCR试剂盒CAS No.:481-46-9
中文名:银杏素
别名:
分子式:C32H22O10
性状:Yellow powder
纯度:97.0%
1)内参照法:
产品仅用于科研在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物,内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记,下游引物不标记。在模板扩增的同时,内标也被扩增。在PCR产物中,由于内标与靶模板的长度不同,二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来,分别测定其荧光强度,以内标为对照定量待检测模板。
2)竞争法:选择由突变克隆产生的含有一个新内切位点的外源竞争性模板。在同一反应管中,待测样品与竞争模板用同一对引物同时扩增(其中一个引物为荧光标记)。扩增后用内切酶消化PCR产物,竞争性模板的产物被酶解为两个片段,而待测模板不被酶切,可通过电泳或高效液相将两种产物分开,分别测定荧光强度,根据已知模板推测未知模板的起始拷贝数。
3)PCR-ELISA法:
利用地高辛或生物素等标记引物,扩增产物被固相板上特异的探针所结合,再加入抗地高辛或生物素酶标抗体-辣根过氧化物酶结合物,终酶使底物显色。常规的PCR-ELISA法只是定性实验,若加入内标,作出标准曲线,也可实现定量检测目的。