1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内完全解冻,使细胞能尽快通过易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
6)**天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
以下是人Ph+急淋白血病细胞系;SUP-B15图片产品信息的认购信息:
细胞名称 人Ph+急淋白血病细胞系;SUP-B15图片
形态特性 母细胞
生长特性 悬浮生长
特征特性 这株细胞来源于一位B细胞全部为费城染色体阳性的8岁小孩的骨髓。 这些细胞表达多个B细胞标记,但不表达T细胞标记。 β-2 微球蛋白,Leu12,My7 (CD13), OKT9 (CD71), OKT10 (CD38) 及 CALLA (CD10)抗体阳性。 CB1, Leu 1 (CD5), Leu2 (CD8), Leu3 (CD4), Leu4 (CD3), Leu5 (CD2), Leu6 (CD1a), Leu9, Leu M1 (CD15), My9 (CD33), 表面抗原 (sIg -)
培养条件 IMDM: Iscove's Modiefied Dulbecco's Medium 质胎牛血清,20%
传代方法 1:2。3天内可长满。
传代情况 PN5
冻存条件 完全培养基+8%DMSO
支原体检测 阴性
STR
同工酶
染色体
注意事项:
1. 人Ph+急淋白血病细胞系;SUP-B15图片接收到细胞,肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张)。
2.用75%的酒精(建议配置75%的酒精的水是过的)。
3.严格无菌操作,打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出(严禁直接倾倒),放入另一无菌容器中(建议换新的培养基培养细胞)。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆,轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落,加入终止液终止。
6.1000rpm,5min离心,重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶,37℃,5%CO2培养。
细胞培养的优点:
1.人Ph+急淋白血病细胞系;SUP-B15图片研究的对象是活细胞
在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备
记录方式可采用摄影照片、缩时电影、电视等多种手段。
5.研究的范围比较广泛
应用的学科领域较为宽广,如细胞学、学、肿瘤学、生物化学、遗传学、分子生物学等;
适用的对象范围广,从低等动物到高等动物,一种动物的不同年龄阶段以及不同组织,都可进行有针对性的研究。
6.研究的费用相对较经济
可提供大量、同一时期、重复性好的、生物学性状相似的实验对象。
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云南含笑Michelia yunnanensis松柏苷531-29-3C16H22O8 ≥97.5%
川芎 Ligusticum chuanxiong Hort阿魏酸松柏酯63644-62-2C20H20O6 ≥98%
人Ph+急淋白血病细胞系;SUP-B15图片非洲马铃果Voacanga africana榴花碱76-98-2C23H30N2O4 ≥95%
扇开狗牙花Ervatamia flabelliformis长春碱衍生物142741-24-0C44H50N4O10 ≥96%
黄连 Chinese goldthread黄连碱3486-66-6C19H14NO4 ≥98%
黄连 Coptis chinensis Franch.盐酸黄连碱6020-18-4C19H14NO4+ ≥98%
白屈菜ChelidoniummajusL.根硫酸黄连碱1198398-71-8C19H14NO4• 1/2H2SO4 ≥98%
香兰叶Pandanus amaryllifolius(6S,9S)-长寿花糖甙185414-25-9C19H30O8 ≥95%
野甘草Scoparia dulcisnone189351-15-3C13H20O3 ≥98%
蛹虫草 Cordycepsmilitaris虫草素73-03-0C10H13N5O3 ≥98%
马桑Coriaria nepalensis马桑宁内酯35481-77-7C15H18O6 ≥98%