1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内完全解冻,使细胞能尽快通过易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
6)**天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
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细胞名称 甲磺酸伊马替尼耐药的胃肠道间质瘤细胞系;GIST-1114图片
形态特性 上皮样
生长特性 贴壁生长
特征特性 该细胞属保藏,其特征特性尚未公开。
培养条件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS
传代方法 1:3传代,3-4天传1次
传代情况 C5
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 阴性
STR
同工酶
染色体
注意事项:
1. 甲磺酸伊马替尼耐药的胃肠道间质瘤细胞系;GIST-1114图片接收到细胞,肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张)。
2.用75%的酒精(建议配置75%的酒精的水是过的)。
3.严格无菌操作,打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出(严禁直接倾倒),放入另一无菌容器中(建议换新的培养基培养细胞)。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆,轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落,加入终止液终止。
6.1000rpm,5min离心,重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶,37℃,5%CO2培养。
细胞培养的优点:
1.甲磺酸伊马替尼耐药的胃肠道间质瘤细胞系;GIST-1114图片研究的对象是活细胞
在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备
记录方式可采用摄影照片、缩时电影、电视等多种手段。
5.研究的范围比较广泛
应用的学科领域较为宽广,如细胞学、学、肿瘤学、生物化学、遗传学、分子生物学等;
适用的对象范围广,从低等动物到高等动物,一种动物的不同年龄阶段以及不同组织,都可进行有针对性的研究。
6.研究的费用相对较经济
可提供大量、同一时期、重复性好的、生物学性状相似的实验对象。
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NALP12 NALP12抗体 规格: 0.2ml
ASF1A 细胞衰老相关蛋白ASF1A抗体 规格: 0.1ml
CD54/ICAM-1 细胞间粘附分子-1抗体 规格: 0.1ml
phospho-LKB1 (Thr363) 磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶抗体 规格: 0.1ml
RAP2B 原基因相关蛋白RAP2B抗体 规格: 0.2ml
COX7A2 细胞色素c氧化酶COX7A2抗体 规格: 0.1ml
Urocortin 尿皮质素抗体 规格: 0.2mlRNF43 环指蛋白43抗体 规格: 0.2ml
EB3 微管相关蛋白EB家族3抗体 规格: 0.2ml
LXR alpha 肝脏X受体抗体 规格: 0.1ml
Phospho-TBK1/NAK (Ser172) 磷酸化NF-κB活化激酶抗体 规格: 0.1ml
KDM5B/PLU1/Jarid1B 组蛋白去甲基化酶JARID1B抗体 规格: 0.2mlGLUR3/GRIA 3 谷氨酸受体3抗体 规格: 0.1ml
莽吉柿Garcinia mangostanaMangostanol呫吨酮184587-72-2C24H26O7 ≥98%
黄独Dioscorea bulbiferaMannioside Anone1038922-95-0C39H62O13 ≥95%
唇形科(Labiatae) 毛萼香茶菜 Rabdosia eriocalyx Hara 叶Maoecrystal A毛萼晶甲96850-30-5C22H28O6 ≥98%
冬凌草Isodon eriocalyxMaoecrystal B毛萼晶乙96850-29-2C22H28O6 ≥95%
甲磺酸伊马替尼耐药的胃肠道间质瘤细胞系;GIST-1114图片正尾叶香茶菜Rabdosia excisaMaoyerabdosin毛叶香茶菜素90468-72-7C24H36O9 ≥95%
柚Citrus maximaMarmin7-[[(2E,6R)-6,7-二羟基-3,7-二甲基-2-辛烯-1-基]氧基]-2H-1-苯并吡喃-2-酮14957-38-1C19H24O5 ≥98%
柚Citrus maximaMarmin acetonide7-[[(2E)-3-甲基-5-[(4R)-2,2,5,5-四甲基-1,3-二氧杂戊环-4-基]-2-戊烯基]氧基]-2H-1-苯并吡喃-2-酮320624-68-8C22H28O5 ≥96%
木紫珠Callicarpa arboreaMartynoside地黄苷67884-12-2C31H40O15 ≥95%
通光散Marsdenia tenacissimaMarsdenoside Fnone858360-61-9C39H60O14 ≥95%
山楂 Crateagus pinnatifidaMaslinic acid山楂酸4373-41-5C30H48O4 ≥98%
云南松Pinus yunnanensisMassonianoside Bnone188300-19-8C25H32O10 ≥95%