lucigen 49013-1 Expresso® Rhamnose SUMO Cloning & Expression System</p>
lucigen Expresso® Rhamnose SUMO Cloning & Expression System</p>
产品简介:北京中北林格供应lucigen 49013-1 Expresso® Rhamnose SUMO Cloning & Expression System,中北林格是lucigen总代理,提供lucigen产品货号报价查询。代理的其他品牌包括Biosearch technologies总代理,epicentre总代理,illumina总代理,ICLLAB总代理,ImmunoReagents总代理。</p>
产品名称:Expresso® Rhamnose SUMO Cloning & Expression System</p>
货号:lucigen 49013-1</p>
品牌:lucigen</p>
供应商:中北林格</p>
规格:5 rxns</p>
存储温度:-20º & -80º C</p>
产地:us</p>
发货地:北京</p>
lucigen 49013-1 Expresso® Rhamnose SUMO Cloning & Expression System说明书详情:</p>
①获得可溶性蛋白从未如此快速和容易</p>
数秒内完成无酶定向PCR克隆。</p>
节省了几天时间用于制备使用载体感受态细胞,无需连接步骤。</p>
严谨控制N端6 xHis标签蛋白表达,使用可切割的SUMO可溶性标签。</p>
系统可以通过T7控制表达或调控鼠李糖启动子表达。</p>
表达产品的特征是无酶克隆。</p>
②完整的克隆蛋白表达系统</p>
SUMO 克隆和蛋白表达系统的设计可以快速,容易和有效的对PCR扩增的基因进行定向克隆和可溶性表达 ,用于形成包涵体的蛋白或不容易可溶性表达的蛋白。pETite® N-His SUMO和 pRham™ N-His SUMO载体使表达的靶向蛋白氨基端带有6xHis-SUMO标签。SUMO(小的泛素样修饰体) 是一个相对小的(100残基)多肽,能够提高许多大肠菌中困难表达蛋白的可溶性表达。</p>
③5秒钟定向克隆PCR扩增的基因</p>
SUMO蛋白克隆表达系统使用表达工程技术,无酶重组克隆策略,将基因连入表达载体采用无缝连接。PCR扩增靶向基因,并在基因两侧加入18bp与载体互补的序列。不同于限制酶方法或无连接酶克隆方法,不需要进一步的对酶处理或PCR产物进行纯化。只需要简单的混合1µl未纯化的PCR反应产物和预处理好的pETite或 pRham N-His SUMO表达载体,立即转化化学感受态细胞即可完成(如图1)</p>
④SUMO 载体包括:</p>
强启动子T7用于高效表达或鼠李糖启动子用于可调控的重组蛋白表达。</p>
利用N末端6×组氨酸 SUMO融合标签增加蛋白可溶性表达,并方便蛋白快速纯化。</p>
载体大小为2.5 kb,易于下游操作。</p>
CloneSmart® 技术,增加克隆效率。</p>
⑤使用SUMO蛋白标签使不可溶蛋白恢复可溶活性</p>
我们使用T7或T7sumo克隆表达系统用于表达或纯化蛋白。大规模表达研究的一些结果是为了鉴定琥珀酸放线杆菌水解酶,如图3.挑选了48个基因用于表达和克隆进pETite T7 C-His载体。大约这些克隆中的一半产生可溶性,具有活性的水解酶蛋白,而另外一部分是不可溶性的表达。产生非可溶性蛋白基因中五个被扩增并克隆进pETite SUMO载体,然后转化进HI-Control BL21(DE3),其中四个恢复为可溶性,并产生活性(表1)。尽管标签移除对于水解酶活性没有必要影响,但是SUMO表达蛋白酶可以有效去除标签。</p>
切割 SUMO蛋白标签</p>
IMAC纯化 N-His-SUMO 标签蛋白后, 标签部分可以被SUMO表达蛋白酶准确移除。SUMO表达蛋白酶识别SUMO结构而不是短的识别序列,所以可以在标签与靶蛋白间进行准确切割,不会进行脱靶切割。6xHis 标签的SUMO表达蛋白酶和切割的N-His-SUMO标签能够通过IMAC被分离并释放出靶向蛋白。</p>
注意:盒子中包含的SUMO蛋白标签是一个特殊版本的SUMO,只能使用Lucigen的SUMO表达蛋白酶才能够进行切割。SUMO表达蛋白酶不能切割野生型的底物。因此,不推荐使用SUMO表达蛋白酶切割野生型的SUMO。</p>
⑥T7 SUMO克隆表达系统含有预处理的pETite® N-His SUMO载体DNA, 用于克隆的HI-Control™ 10G化学感受态细胞和用于蛋白表达的HI Control BL21(DE3)化学感受态细胞。也包含SUMO阳性对照插入DNA,转化阳性对照PUC DNA,SUMO表达蛋白酶,SUMO切割对照蛋白和鉴定克隆的正反向引物。</p>
鼠李糖SUMO克隆表达系统包含预处理的pRham N-His SUMO载体DNA,单管转化用 E. cloni 10G化学感受态细胞,自诱导试剂20%鼠李糖溶液和15%葡萄糖溶液,还包括SUMO阳性对照插入DNA,转化阳性对照PUC DNA,SUMO表达蛋白酶,SUMO切割对照蛋白和鉴定克隆的正反向引物。</p>
Product Description
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Size
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Cat. No.
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Expresso® Biotin SUMO C-Biotin System
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5 rxns
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49044-1
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10 rxns
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49044-2
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Expresso® Biotin SUMO N-Biotin System
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5 rxns
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49043-1
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10 rxns
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49043-2
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Expresso® Rhamnose SUMO Cloning and Expression System
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5 rxns
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49013-1
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10 rxns
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49013-2
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Expresso® T7 SUMO Cloning and Expression System
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5 rxns
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49003-1
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10 rxns
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49003-2
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Arabinose Solution, 1000X
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5 x 1.0 ml
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49023-1
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Glucose Solution, 15% w/v
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5 x 1.25 ml
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49022-1
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HI-Control™ 10G Chemically Competent Cells (SOLOs)
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12 rxns (SOLOs)
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60110-1
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HI-Control™ BL21(DE3) Chemically Competent Cells (SOLOs)
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12 rxns (SOLOs)
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60435-1
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Rhamnose Solution, 20% w/v
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5 x 1.25 ml
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49021-1
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SUMO Express Protease
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200 U
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30801-2
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对此产品有兴趣,可联系中北林格获取更多详细信息。</p>
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