epicentre HTFP061 pCC2 Forward Sequencing Primer
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产品名称:pCC2 Forward Sequencing Primer
货号:HTFP061
规格:1 nmole
存储温度:-20℃
品牌：lucigen / epicentre</p>
供应商：中北林格</p>
产地：us</p>
发货地：北京</p
epicentre HTFP061 pCC2 Forward Sequencing Primer 产品描述
应用领域
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使用CopyControl™自动诱导解决方案，可以从任何生物样品中制备完整且无偏的fosmid文库，这些文库可以保持单拷贝数，并根据需要诱导为高拷贝数。
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从环境样品（例如水和土壤）中存在的微生物构建宏基因组文库。
CopyControl™Fosmid库生产试剂盒*为构建约40 kb克隆的库提供了一种有效且改进的方法。CopyControl pCC1FOS™载体同时包含大肠杆菌 F因子单拷贝复制起点和诱导型高拷贝ori V（图1）。CopyControl Fosmid克隆通常以单拷贝形式生长，以确保插入片段的稳定性并成功克隆编码和表达的毒性蛋白和不稳定的DNA序列。然后，在DNA纯化之前，每个细胞zui多可诱导CopyControl Fosmid克隆50个拷贝。该步骤大大提高了DNA产量，同时保持了质粒的稳定性。
CopyControl HTP Fosmid库包含pCC2FOS™Vector，该载体设计用于优化末端测序结果，尤其是在高通量环境中。与Agencourt Bioscience Corporation合作设计的引物盒，使引物退火位点的3´末端距���体/插入连接点仅3个碱基，从而消除了浪费且昂贵的载体序列读取。另外，每个引物3'末端的7个碱基的序列经过特殊设计，以zui大程度地减少模板纯化后对任何污染的大肠杆菌 DNA的错误引物（图2）。
该试剂盒采用了克隆DNA随机剪切产生的平末端DNA片段的策略，以产生比通过部分限制性核酸内切酶消化所获得的基因组更完整，更公正的基因组文库。首先将基因组DNA剪切成约40kb的片段。剪切后的DNA进行末端修复，以生成钝的5′-磷酸化末端，然后通过低熔点琼脂糖凝胶进行大小选择并从中回收。zui后，将大小选择好的DNA连接到可克隆的CopyControl pCC1FOS或pCC2FOS载体中，使用超高效MaxPlax™Lambda包装提取物（> 10 9 pfu / µg DNA）包装，并包被在试剂盒中提供的TransforMax™EPI300™ 大肠杆菌（图3）。
好处
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可提供CopyControl的CopyControl pCC1FOS和pCC2FOS载体：线性化，去磷酸化，纯化并准备连接。
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无需部分限制核酸内切酶消化或脉冲场凝胶电泳即可制备用于克隆的基因组DNA。
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使用pCC2FOS载体zui大化高通量末端序列结果（图4）。
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克隆可以从单个拷贝诱导到每个细胞多达50个拷贝（图5）。**地获得更高的DNA产量，同时保持单拷贝数克隆的稳定性。
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高效的λ包装消除了背景和误报。
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比BAC克隆更快更容易。
epicentre HTFP061 pCC2 Forward Sequencing Primer 图例说明
图1. CopyControl™矢量地图。用于CopyControl Fosmid库生产的CopyControl pCC1FOS™和pCC2FOS™载体在Eco 72 I（平端）位点线性提供，然后脱磷酸化。该载体已准备好克隆约40 kb的末端修复（平末端）基因组DNA。
Figure 1. CopyControl™ Vector map. The CopyControl pCC1FOS™ and pCC2FOS™ Vectors for CopyControl Fosmid library production are supplied linearized at the Eco72 I (blunt) site and then dephosphorylated. The vector is ready for cloning end-repaired (blunt-end) genomic DNA of approximately 40 kb.
图2. CopyControl™pCC2FOS™矢量引物盒。该载体与pCC1FOS载体的区别在于新引物盒的工程化，该引物盒消除了浪费的源自载体的测序读数，并zui大程度地减少了在大肠杆菌基因组上引发的可能性。
Figure 2. The CopyControl™ pCC2FOS™ Vector primer cassette. The vector differs from the pCC1FOS Vector by the engineering of a new primer cassette that eliminates wasteful vector-derived sequencing reads and minimizes the potential for priming on the E. coli genome.
图3（单击放大）。使用CopyControl™Fosmid库生产工具包准备fosmid库的过程概述。一旦准备好文库，就可以使用EPICENTRE的DirectLysis Fosmid96试剂盒或FosmidMAX™DNA纯化试剂盒，以小体积培养单个克隆，并诱导成多拷贝数，从而获得高产率的高纯度DNA，用于指纹，测序等。
Figure 3 (click to enlarge). Overview of the process for preparing a fosmid library using the CopyControl™ Fosmid Library Production Kits. Once the library has been prepared, individual clones can be cultured in small volume and induced to multiple-copy number for high yields of high-purity DNA for fingerprinting, sequencing, etc., using EPICENTRE's DirectLysis Fosmid96 kit or FosmidMAX™ DNA Purification Kit.
图4.用pCC2FOS™正向引物在pCC2FOS™克隆上以1 / 48x BigDye™稀释度获得的典型测序结果。用pCC2FOS反向引物获得了相似的结果（数据未显示）。
Figure 4. Typical sequencing results obtained with the pCC2FOS™ Forward Primer on a pCC2FOS™ clone at 1/48x BigDye™ dilution. Similar results were obtained with the pCC2FOS Reverse Primer (data not shown).
图5.每个细胞zui多可复制50个拷贝的CopyControl™Fosmid克隆，以大大提高DNA产量。 从未诱导的（–）和诱导的（+）CopyControl克隆中分离出的fosmid DNA的Hin d III消化物。消化液占样品总体积的三分之一（8 µl），并通过琼脂糖凝胶电泳进行分析。M线，千磅梯子。
Figure 5. CopyControl™ Fosmid clones can be induced up to 50 copies per cell to greatly increase DNA yield. Hind III digests of fosmid DNA isolated from uninduced (–) and induced (+) CopyControl clones. Digests contained one-third (8 µl) of the total sample volume and were analyzed by agarose gel electrophoresis. Lane M, Kilobase ladder.
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