MasterAmp™AmpliTherm™,Taq,Tfl和Tth DNA聚合酶*是用于PCR的重组热稳定DNA聚合酶。这些酶在高于70°C的温度下具有zui佳的DNA合成活性,可以在高达95°C的温度下使用。MasterAmp DNA聚合酶与含甜菜碱的MasterAmp™PCR增强剂的10倍溶液一起提供**,可增加获得所需扩增产物的可能性,PCR的可重复性,并提高多重PCR中PCR产物产量的一致性。
单位定义:在标准测定条件下,于70°C在30分钟内,一单位MasterAmp DNA聚合酶将10 nmol的dNTPs转化为酸不溶性物质。
储存缓冲液:含有50 mM Tris-HCl(pH 7.5),100 mM NaCl,0.1 mM EDTA,0.5%Tween 20、0.5%NP-40和1 mM DTT的50%甘油。
质量控制:测试MasterAmp DNA聚合酶是否存在可检测的非特异性核酸外切酶和核酸内切酶以及RNase活性,并在PCR中进行功能测试。
详细分类
①MasterAmp™AmpliTherm™DNA聚合酶
应用领域
MasterAmp™AmpliTherm™DNA聚合酶是用于PCR的专有重组热稳定DNA聚合酶。它既没有像Taq DNA聚合酶那样具有5´→3´结构依赖性核酸外切酶活性,又缺乏在其他一些DNA聚合酶中具有3´→5´校对核酸外切酶活性。使用专有程序将酶纯化至均质,实际上可以消除污染的xi菌DNA。
②MasterAmp™ Taq DNA聚合酶
MasterAmp™ Taq DNA聚合酶是源自水生栖热菌(Thermus aquaticus)的热稳定DNA聚合酶。它在高于70°C的温度下具有zui佳活性,是第1种用于PCR的热稳定酶。它具有固有的5´→3´结构依赖性核酸外切酶活性,但缺乏3´→5´校对核酸外切酶活性。该酶使用专有程序进行了高度纯化,实际上消除了污染细jun的DNA。
③MasterAmp™ Tfl DNA聚合酶 MasterAmp™ Tfl DNA Polymerase
Derived from the thermophilic bacterium Thermus flavus, MasterAmp™ Tfl DNA Polymerase is a recombinant DNA polymerase with good thermostability (to ~95°C) and processivity (15-kb PCR products). It is highly purified using a proprietary procedure that virtually eliminates contaminating bacterial DNA.
MasterAmp™ Tfl DNA聚合酶 源自嗜热细jun黄热菌(Thermus flavus),是一种重组DNA聚合酶,具有良好的热稳定性(至约95°C)和可加工性(15-kb PCR产物)。它使用专有程序进行了高度纯化,几乎消除了污染性xi菌DNA。
MasterAmp Tfl 20X PCR缓冲液: 1.0 M Tris-HCl(pH 9.0)和0.4 M硫酸铵。还提供了25 mM的MgCl 2溶液以优化反应中镁离子的浓度。dNTP不包括在内;对于大多数应用,每种dNTP的zui终浓度应为200 µM。
MasterAmp Tfl 20X PCR Buffer: 1.0 M Tris-HCl (pH 9.0) and 0.4 M ammonium sulfate. A 25 mM solution of MgCl2 is also provided for optimization of the magnesium ion concentration in the reaction. dNTPs are not included; each dNTP should be added to a final concentration of 200 µM for most applications.
④MasterAmp™ Tth DNA聚合酶
MasterAmp™ Tth DNA聚合酶是嗜热栖热菌(Thermus thermophilus)的重组DNA酶,在高达〜95 °C的温度下都具有DNA依赖性和RNA依赖性(即逆转录酶)DNA聚合酶活性。MasterAmp Tth DNA聚合酶采用专有程序进行了高度纯化,实际上消除了污染细jun的DNA。
[Mg 2+ ]和[Mn 2+ ]的优化:应该优化镁和锰离子的浓度以用于DNA合成。每个金属阳离子的zui佳浓度高度依赖于dNTP浓度以及所使用的模板,引物和实验方案。对于许多模板,如果反应中每个dNTP的浓度为0.2 mM ,则使用MasterAmp Tth DNA聚合酶的镁离子的zui佳浓度约为1.5 mM。如果与1.5 mM Mg 2+一起使用,则对于许多模板而言,RNA依赖性DNA合成的Mn 2+zui佳浓度约为0.5 mM。对于RT-PCR反应,我们建议使用3.0 mM Mg 2+和0.5 mM Mn 2+对于大多数模板。另外,我们建议使用含硫酸铵的MasterAmp™PCR优化试剂盒进行快速PCR优化。