使用ELISA检测试剂盒进行试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应。
在ELISA中，进行各项实验条件的选择是很重要的，其中包括：
固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。
包被抗体(或抗原)的选择：将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18～24小时。蛋白质包被的适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值大而蛋白量少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg/ml。
除此之外还要注意以下事项：
1.确定ELISA检测试剂盒在有效期内;
2.仔细阅读说明书;
3.按说明书确定所有试剂齐全(数量、体积);
4.标本制备要规范，每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备，尽量分装做备份。短期内无法实验者，注意低温保存;
5.根据检测标本数量确定所需试剂的量;
6.准备好所有实验额外所需物品，如试管、吸头、移液器、离心机等;
7.按说明书将所用试剂平衡至室温，配制所需试剂。