Elisa试剂盒操作方法与步骤

日期：2025-01-27 13:21

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摘要：

Elisa试剂盒的操作方法：

1.包被抗体：用包被缓冲液稀释特异性抗体球蛋白至*适浓度（1～10μg/ml），每凹孔加0.3ml，4℃过夜，或37℃水浴3小时，贮存冰箱。

2.洗涤：移去包被液，凹孔用洗涤缓冲液（含0.05%吐温-20）洗3次，每次5分钟。

3.分2组，a组加酶标记抗原和被检抗原Elisa试剂盒混合液0.2ml，b组只加酶标记抗原液0.2ml，37℃作用1～2小时。（混合液可作成不同稀释度）

4.洗涤：移去包被液，凹孔用洗涤缓冲液（含0.05%吐温-20）洗3次，每次5分钟。

5.加入0.2 ml底物溶液于每个凹孔（OPD或OT），室温作用30分钟（另作一空白对照，0.4ml底物加0.1ml终止剂）。

6.加终止剂：每凹孔加2M H2SO4或2M柠檬酸0.05ml。

7.用酶标比色计测定a、b两组OD值，并求出a、b、OD值的差数。

本方法首先将特异性抗体吸附于固相载体表面，我们把抗原和抗体吸附到固相载体表面的这个过程，称为包被，也可叫做致敏。经洗涤后分成两组：一组加酶标记抗原和被测抗原的混合液，而另一组只加酶标记抗原，再经孵育洗涤后加底物显色，这两组底物降解量之差，即为我们所要测定的未知抗原的量。

Elisa试剂盒的注意事项：

1.干冰是固体二氧化碳，温度为零下78℃，湿冰就是冰的温度，一般为冷冻条件的温度，如在零下20℃冷冻的冰的温度为零下20℃。对于一些酶类等蛋白产品，需要干冰运输，其他大多数生化试剂采用湿冰即可；

2.运输常温试剂的时候，不需要冰。对于需要冷藏的试剂，在用冰运输的时候，要把试剂同冰之间有隔离物，不能直接接触试剂包装，如试剂外面加装盒子，在盒子外面加冰，基本都采用冰块，不能直接用水结成的冰，因为冰融化后会形成水，容易污染试剂。加冰块的量没有严格限制，以试剂Elisa试剂盒四周都处于冰块包围为宜；

3.不要小看生物试剂的量，很多抗体类试剂、酶类试剂是很贵的，可以达到上千元/mg(即每公斤几百，上千万元），其保存条件也是很严格的，否则容易失去活性。运输的时候建议使用冰块，而非碎冰，

主要原因：（1）碎冰的温度高，而冰块的温度更低；

（2）冰块可以更长时间的保持低温；

（3）碎冰容易化成水。

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