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带您了解ELISA实验操作过程的九点要素

日期:2025-02-28 21:03
浏览次数:320
摘要:大部分elisa检测均以血清为标本,那么在ELISA实验过程中血清标本有哪些注意事项呢? 具体注意事项: 1、要注意避免出现严重溶血。血红蛋白中含有血红素基团,其有类似过氧化物的活性,因此,在以HRP为标记酶的ELISA测定中,如血清标本中血红蛋白浓度较高,则其就很容易在温育过程中吸附于固相,从而与后面加入的HRP底物反应显色。 2、血清标本如是以无菌操作分离,则可以在2~8℃下保存一周,如为有菌操作,则建议冰冻保存。样本的长时间保存,应在-70℃以下。 3、冰冻保存的血清标本须注意避免因停电等造成的反复冻融。标本的反复冻融所产生的机械剪切力将对标本中的蛋白等分子产生破坏作用,从而引起假阴性结果。此外,冻融标本的混匀亦应注意,不要进行剧烈振荡,反复颠倒混匀即可。

ELISA实验过程中,操作过程中有一些易被人们忽视小细节,但这些小细节却对试验结果会产生直接影响。以下是ELISA控制操作过程的九点要素:



一、严格按照试剂说明书进行操作。操作前将试剂在室温下平衡30~60min。

二、加样后及时放人孵箱。标本较多时,要分批操作。按说明步骤严格控制操作时间,防止孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗彻底。

三、封板温育时,各孔一定要封严,防止阳性标本的液体蒸发,产生周边现象从而导致“花板”的出现。

四、用洗板机洗板时,保证洗液注满各孔,洗板针畅通,洗完板后在吸水纸(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干:还要防止针口有纤维蛋白或异物,这些异物在洗板的过程中易产生拖带现象而导致“花板”的出现。

五、合理安排检测量,以免反应板过多造成洗板等待时间长。

六、加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。

七、显色剂尽量在临用前配制,坚持不用过期显色剂,肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用。

八、加样时保持显色剂不外流;A、B液应避免接触金属器械。加终止液时应避免产生气泡。

九、应保证酶标板清洁,整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸。以上的措施可以使“花板”降至限度。从而提高检测的特异性。并得到更准确、可靠的实验结果。

以上是ELISA实验操作过程你了解了吗?

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