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通蔚生物教您如何选择合适的二抗
日期：2024-10-09 03:20
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摘要：1.一抗的物种来源
根据一抗的物种来源选择相应的抗该物种的二抗。
2.一抗的亚型
一般来说多克隆抗体主要是IgG类免疫球蛋白，因此相应的二抗就是抗IgG抗体。而单克隆抗体则相对复杂些，具有多种亚型，二抗除了要与一抗的种属来源相一致，还需与一抗的亚型相匹配。
3.二抗的种属来源
一般来说，不同的种属来源的二抗在实验里没有太多的差别。特殊的实验里类似双标的免疫实验更合适。
4.选择哪种形式的二抗，是整个IgG分子，Fab片段，还是F(ab')2片段？
整个IgG分子：此种抗体适用于多数情况。
Fab片段：它们只有一个结合位点，一般用来封闭内源性免疫球蛋白。
F(ab')2片段：该种抗体是由两个靠二硫键连接的用于结合抗原的Fab片段组成，这些抗体用在特定的情况中，如需要避免抗体与具有Fc受体的细胞结合的情况。
5.二抗的偶联标记
一般来讲，偶联到二抗上的探针主要有酶（辣根过氧化酶HRP和碱性磷酸酶AP等），荧光基团（FITC, TR, PE）和生物素。选用哪种探针的二抗主要取决于具体的实验。
如何选择二抗？通常情况下，某一特定的实验中可能同时有几种二抗可供选择，如何能选择到适合该实验的二抗，需要综合以下几个方面进行考虑：
1.一抗的物种来源
根据一抗的物种来源选择相应的抗该物种的二抗。
2.一抗的亚型
一般来说多克隆抗体主要是IgG类免疫球蛋白，因此相应的二抗就是抗IgG抗体。而单克隆抗体则相对复杂些，具有多种亚型，二抗除了要与一抗的种属来源相一致，还需与一抗的亚型相匹配。
3.二抗的种属来源
一般来说，不同的种属来源的二抗在实验里没有太多的差别。特殊的实验里类似双标的免疫实验更合适。
4.选择哪种形式的二抗，是整个IgG分子，Fab片段，还是F(ab')2片段？
整个IgG分子：此种抗体适用于多数情况。
Fab片段：它们只有一个结合位点，一般用来封闭内源性免疫球蛋白。
F(ab')2片段：该种抗体是由两个靠二硫键连接的用于结合抗原的Fab片段组成，这些抗体用在特定的情况中，如需要避免抗体与具有Fc受体的细胞结合的情况。
5.二抗的偶联标记
一般来讲，偶联到二抗上的探针主要有酶（辣根过氧化酶HRP和碱性磷酸酶AP等），荧光基团（FITC, TR, PE）和生物素。选用哪种探针的二抗主要取决于具体的实验。