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上海通蔚生物elisa试剂盒的灵敏度怎么看
ELISA试剂盒的灵敏度可以通过以下几种方法进行判断:
1、标准曲线法:通过测定标准品和样品稀释液的吸光度值,计算出均值和标准差,均值加或减2倍标准差的值所对应的浓度即为该试剂盒的灵敏度。
2、交叉反应率:使用试剂盒检测与目标抗原类似的物质,计算交叉反应率。交叉反应率越低(通常<10%),表明试剂盒的特异性越强,间接反映灵敏度较高。
3、 理论计算:根据质量作用定律,推测酶活性放大ELISA方法的低检测限可达1.7×10^-24 mol/L。虽然实际应用中由于多种因素影响,往往达不到这个水平,但表明ELISA在灵敏度方面的改进潜力很大。
影响ELISA试剂盒灵敏度的因素包括:
1、样本处理:确保所有样本均为澄清的液体,沉淀或悬浮物应离心去除。保存于-20℃或-80℃的样本在1~6个月内检测,4℃保存的样本应在1周内进行检测。
2、实验条件:实验误差、标准品稀释不准确、加样误差、显色条件不稳定等因素都会影响实验结果。
3、试剂纯度和仪器精度:反应条件和试剂纯度以及仪器精度等因素也会影响ELISA试剂盒的灵敏度。
提高ELISA试剂盒灵敏度的建议:
1、选择合适的试剂盒:在选择试剂盒时,应关注曲线上小浓度值的准确性,而不是试剂盒上标注的灵敏度。
2、优化实验条件:确保标准曲线的线性关系良好(R²≥0.99),标准品的浓度与吸光度值呈现良好的线性关系。
3、质量控制:通过空白对照和阴性对照检测,确保实验结果的准确性。
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