ELISA实验中温育需要注意的细节

日期：2024-11-21 23:23

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摘要：而温育又是ELISA测定中影响测定成败关键的一个因素。ELISA作为一种固相免疫测定，抗原抗体的结合反应在固相上进行，要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原完全结合，必须在一定的温度条件下反应一定的时间。温育所需时间与温度成反比，即温度越高，则所需时间相对较短。常用的温育温度有37℃和室温，其次是43℃和2～8℃。擅自改变说明书操作，使用自己喜欢的温育时间和温育温度，造成一些不必要的麻烦。因为，不同试剂盒有不同的温育时间和温育温度的选择，随意更改温育时间或者温育温度将导致试验结果出现偏差。因此，关于温育，在实际测定操作中一定要注意以下几点： 1、要保证在设定的温度下有足够的反应时间。具体的做法是，用一小温度计放置板孔反应溶液中测量观察即可。 2、温育温度的选择。我们建议在临床ELISA测定中尽量使用较低温育温度较长反应时间的条件。 3、“边缘效应”的排除。使用水浴或在将反应溶液加入至板孔中时，将板和溶液均加热至温育温度(如37℃)，就可以很容易地排除“边缘效应”，并且可提高测定的重复性。

ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。

在检测时，受检标本（测定其中的抗原）与固相载体表面的抗体反应。洗涤后加入酶标记的抗体，通过反应结合在固相载体上。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。

而温育又是ELISA测定中影响测定成败关键的一个因素。ELISA作为一种固相免疫测定，抗原抗体的结合反应在固相上进行，要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原完全结合，必须在一定的温度条件下反应一定的时间。温育所需时间与温度成反比，即温度越高，则所需时间相对较短。常用的温育温度有37℃和室温，其次是43℃和2～8℃。擅自改变说明书操作，使用自己喜欢的温育时间和温育温度，造成一些不必要的麻烦。因为，不同试剂盒有不同的温育时间和温育温度的选择，随意更改温育时间或者温育温度将导致试验结果出现偏差。因此，关于温育，在实际测定操作中一定要注意以下几点：

1、要保证在设定的温度下有足够的反应时间。具体的做法是，用一小温度计放置板孔反应溶液中测量观察即可。

2、温育温度的选择。我们建议在临床ELISA测定中尽量使用较低温育温度较长反应时间的条件。

3、“边缘效应”的排除。使用水浴或在将反应溶液加入至板孔中时，将板和溶液均加热至温育温度(如37℃)，就可以很容易地排除“边缘效应”，并且可提高测定的重复性。

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