ELISA实验加样时有气泡的原因和需要注意的细节

ELISA实验加样时通常气泡都是聚集在酶标板的孔周围，导致孔中液体不能与孔壁有效接触，使孔内反应不均一。很多说明书、教科书上也都提到，加样时要避免出现气泡，这到底是什么原因呢﹖因为在做实验的过程中，有时为了打干净枪头里面的液体，很容易产生气泡，是不是这样对实验结果会后什么影响?
原因：
1.通常气泡都是聚集在酶标板的孔周围，导致孔中液体不能与孔壁有效接触，使孔内反应不均一。
2.包被时有气泡的话，将导致包被不完全实际包被里下降―–弱阳性甚至假阴性。
3.封闭时有气泡的话，将导致大里未结合位点的存在，引起非特异性结合-–本底增高，假阳性。
4.加样时有气泡的话，抗原抗体不能有效的结合––弱阳性甚至假阴性。
5.加二抗时有气泡的话，抗原抗体不能有效的结合––弱阳性甚至假阴性（竞争法相反-—–一假阳性〉。
6.加显色液时有气泡的话-—–显色不完全。
7.加终止液时有气泡的话（1、不能完全终止反应2、影响酶标仪比色，oD值增高)
8.洗涤时有气泡的话，非特异性结合物不能完全洗去，做无用功。
注意事项：
精准的仪器和准确的操作是保证ELISA结果准确关键，怎样的加样方式才是正确呢?ELISA实验中一般有5次加样，即加标本、加检测抗体、加酶结合物和加显色底物及终止液。
1.实验室使用的微量加样器应注意保养并定期校正。ELISA比较敏感，每孔加入液体量误差会导致结果读数差别，因此避免仪器带来误差。
2.加样前，溶液充分混匀，垂直悬空加入液体，避免加在孔壁上，不可产生气泡。3.加样时避免液体溅出，如有样本溅出，应用吸水纸轻轻拭干，并做相应记录。4.如果加样枪漏气以至于加样的量不够，不能用枪吸出再加，做相应记录实验。5.每次加样顺序一致，尤其底物、终止液顺序一致，保证每个孔显色时间相同。