elisa试剂盒实验操作的实用技巧

elisa试剂盒包含了抗原、抗体、活性介质和酶等组分，当抗原抗体相互结合时，就会形成抗原抗体复合物。当复合物中含有活性介质时，它可以使一种特定的酶有活性，这种酶可以将抗原和抗体中的某一物质催化变成另一物质，产生具有一定的吸光度的产物，这就是elisa 试剂盒的基本原理。
由于elisa 试剂盒的容易操作、易于反应性能进行管理和检测，以及检测准确、结果可靠等优点，它成为目前应用为广泛的免疫学技术之一，是诊断和检测抗原抗体的有力工具。
试剂的准备
按elisa试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。LIS中用的蒸馏水或去离子水，包括用于洗涤的，应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液应用pH计测量较正。从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用。试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。
加样
在ELISA中一般有3次加样步聚，即加标本，加酶结合物，加底物。加样时应将所加物加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。
加标本一般用微量加样器，按规定的量加入板孔中。每次加标本应更换吸嘴，以免发生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加样。有此测定(如间接法ELISA)需用稀释的血清，可在试管中按规定的稀释度稀释后再加样。也可在板孔中加入稀释液，再在其中加入血清标本，然后在微型震荡器上震荡1分钟以保证混和。加酶结合物应用液和底物应用液时可用定量多道加液器，使加液过程迅速完成。
保温
在ELISA中通常有两次抗原抗体反应，即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间，这一保温过程称为温育(incubation)，有人称之为孵育，在ELISA中似不恰当。