ELISA试剂盒的关键步骤-清洗

ELISA试剂盒实验一般包含两个或以上的孵育步骤，中间以洗涤隔开。ELISA通常在96孔板中开展，其上包被了结合抗原或抗体。在封闭步骤后，包被后的平板首先与一抗或抗原孵育。随后通过一些洗涤步骤去除未结合(低亲和力)的抗原-抗体复合物。接着，平板与二抗孵育。这种带有酶的抗体与高亲和力的抗原-抗体复合物结合。之后，又是一轮洗涤。是添加底物并检测信号。下面就让上海通蔚生物为您讲解关于洗涤的具体操作。
洗涤参数:
一些参数会影响洗涤步骤的效果。个主要的参数是洗涤里。自动洗板机会分配洗涤液。如果你之前速遇过高背景，那么不要犹豫，将洗涤里调为高，是比包被体积更高。太少的洗涤液会让一部分分析表面洗涤不到，从而明显增加背景。所有反应孔的洗涤里必须相同。ELIS板的制造商通常会在试剂盒的使用手册中列出包被里。行业中通常使用的包被里是2001。如果你的试剂盒也是这样，那么制造商可能会建议使用300u1洗涤液进行洗涤，以便清洁整个反应孔的壁。一般来说，洗涤里越高，则孵育步骤残留的抗体或抗原里就越少。
洗涤次数:

影响洗涤效果的主要参数是洗涤循环的里。当然，洗涤次数越多，背景越低。然而，太多次的洗涤会降低信号强度，使其难以测定。通常的做法是在每次抗体或抗原孵育后重复洗涤三次。不过，ELISA板的制造商会对洗涤次数提出建议。一般而言，制造商包被平板需要的洗涤次数比用户包被的平板要少。对于用户包被的ELISA板，必须优化洗涤次数。

ELISA实验虽然看起来有点简单，但是这并不能成为我们掉以轻心的借口，实验过程中应该仔细检查洗涤步骤，保证实验的结果。
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