通蔚生物共价结合型果胶(CSP)含量测试盒测定意义介绍

通蔚生物共价结合型果胶(CSP)含量测试盒测定意义介绍

测定意义:
果胶是构成细胞初生壁和中胶层的主要成分,主要由原果胶、果胶酸甲酯和果胶酸组成。果胶中含有半乳糖醛酸、乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸等,是许多高等植物细胞壁中含量丰富的多糖成分,其独特的物理、化学性质影响着植物源食品的口感和品质。果胶间以Ca2+桥及其他离子键、氢键、糖苷键、酯键和苯环偶联的方式交联,通过不同的抽提方法可以提取各种形式的果胶,如水溶性果胶(WSP)、离子结合型果胶(ISP)和共价结合果胶(CSP)。
测定原理:
利用带有螯合剂的碱溶液提取共价结合型果胶(CSP),采用咔唑比色法测定果胶含量。果胶水解成半乳糖醛酸,在硫酸溶液中与咔唑试剂进行缩合反应,生成物质在530 nm处有 吸收峰。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、80%乙醇、丙酮、浓硫酸(不允许快递)、研钵和蒸馏水
样品的前处理:
1、细胞壁的提取:取约0.3g样本,加入1mL 80%乙醇,室温快速匀浆,95℃水浴20min,冷却至室温,4000g 25℃离心10min,弃上清。沉淀加入1.5mL80%乙醇和丙酮各洗一遍(涡旋振荡2min左右,4000g 25℃离心10min,弃上清即可),沉淀即为粗细胞壁,加入1mL试剂一(去除淀粉)浸泡15小时,4000g 25℃离心10min,弃上清,将沉淀干燥,称重得细胞壁物质(CWM)。
2、CSP的提取:称取烘干的CWM 3mg,加入1mL试剂二,充分匀浆(若烘干物质质地坚硬,可先研碎后再加入1mL试剂二匀浆,或者用匀浆器匀浆)。8000g 4℃离心10min,取上清液待测。
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