产品名称：甲基柠檬酸合酶(MCS)测试盒(微量法)

甲基柠檬酸合酶(MCS)测试盒
测定方法:   微量法
测定规格:   100管/96样
保存条件:   低温避光保存
有 效 期:     6个月
注     意 :     正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

 测定意义:

MCS广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体基质中,与柠檬酸合酶(CS)共同参与三羧酸循环的调节。

测定原理:

MCS催化丙酰CoA和草酰乙酸产生甲基柠檬酰辅酶A,进一步水解产生甲基柠檬酸;该反应促使无色的DTNB转变成黄色的TNB,在 412nm处有特征吸光值。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰、无水乙醇和蒸馏水

样本的前处理:

组织、或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:
①称取约0.1g组织或收集500万细胞,加入1mL试剂一和10uL 试剂三,用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
②将匀浆600g,4℃离心5min。
③弃沉淀,将上清液移至另一离心管中,11000g,4℃离心10min。
④上清液即胞浆提取物,可用于测定从线粒体泄漏的CS(此步可选做)。
⑤在步骤④的沉淀中加入200uL试剂二和2uL 试剂三,超声波破碎(冰浴,功率20%或200W,超声3秒,间隔10秒,重复30次),用于线粒体CS测定。