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产品详情
  • 产品名称:Taq DNA Polymerase(含预混Mg2 +的10×Taq Buffer)

  • 产品型号: 500 U, 2.5 U/ul
  • 产品厂商:通蔚生物
  • 产品价格:201
  • 折扣价格:119
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简单介绍:
Taq DNA Polymerase是从克隆有Thermu aquaticus DNA Polymerase 基因的大肠杆菌经诱导表达后分离纯化的,其分子量为 94 KD。Taq DNA Polymerase 具有5-3’DNA聚合酶活性和 5-3’外切核酸酶活性,无 3-5’外切酶活性。在 PCR 反应中,Taq DNAPolymerase延伸速度为 1-2 kb/分钟,产物 3’端带 A,可直接用 TA 载体克隆。
详情介绍:


Taq DNA Polymerase(
含预混Mg2 +的10×Taq Buffer)
产品特点
Taq DNA Polymerase是从克隆有Thermu aquaticus DNA Polymerase 基因的大肠杆菌经诱导表达后分离纯化的,其分子量为 94 KD。Taq DNA Polymerase 具有5-3’DNA聚合酶活性和 5-3’外切核酸酶活性,无 3-5’外切酶活性。在 PCR 反应中,Taq DNAPolymerase延伸速度为 1-2 kb/分钟,产物 3’端带 A,可直接用 TA 载体克隆。

成分规格

产品组成

规格

Taq DNA Polymerase

250U/ 2.5U/μl

10 × Taq Buffer(含 Mg2+)

1m / 2*1 ml

-20℃,有效期 1 年

本产品仅供科研使用,不得用于其它用


使用方法
注 意:以下举例为常规PCR反应体系和反应条件,实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的调整和优化)
1. PCR 体系:
推荐体系(50 μl)

试剂

用量

模板 DNA

< 1μg

10 × Taq PCR Buffer

5μl

dNTP Mixture(2.5 mM each)

4μl

Primer 1 (10 μM)

2μl

Primer 2 (10 μM)

2μl

Taq DNA Polymerase (2.5 U/μl)

0.5 ~ 1μl

ddH2O

Up to 50μl


注 意:
A 引物浓度请以终浓度 0.1-1.0μM 作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下,可提高引物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度,由此优化反应体系。
B 镁离子浓度请以终浓度 1.5-3mM 作为设定范围的参考。可根据不同的引物对和模板来调节镁离子浓度,由此优化反应体系)
2. PCR 程序

过程

温度

时间

预变性

94℃

5min

2535cycles

变性

94℃

30sec

退火

55-65

30sec

延伸

72

1kb/30sec

终延伸

72

5min


注 意:
a 一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度 Tm 低 5℃,无法得到理想的扩增效率时,适当降低退火温度;发生非特异性反应时,提高退火温度,由此优化反应条件。
b 延伸时间应根据所扩增片段大小设定,Taq DNA Polymerase 的扩增效率为 1 kb/30 sec。
C 可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太多,错配机率会增加,非特异性背景重。所以,在保证产物得率的前提下,应尽量减少循环次数)
3. 结果检测:
反应结束后取 5 μl 反应产物,加入适量上样缓冲液后进行琼脂糖凝胶电泳检测。
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