产品名称：4-香豆酸：辅酶A连接酶(4CL)测试盒(微量法)

4-香豆酸:辅酶A连接酶(4CL)测试盒
测定方法:    微量法
测定规格:    100管/48样
保存条件:    低温避光保存
有 效 期:     6个月
注   意:     正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:
4CL 是连接苯丙酸途径与木质素特异合成途径的关键酶,主要催化肉桂酸生成相应的肉桂酸辅酶 A 酯,是合成木质素与其他苯丙烷类化合物的代谢流向调控点。该酶主要存在于高等植物、酵母和菌类中,研究该酶可以探讨多种生物细胞发育过程中木质素沉积的代谢机理,为减少水果石细胞含量而提高其品质提供依据。

测定原理:
4CL 催化 4-香豆酸和 CoA 生成 4-香豆酸 CoA,在 333nm 下测 4-香豆酸 CoA 生成速率,即可反映 4CL 活性。

需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板(UV 板)、研钵、冰和蒸馏水。

粗酶液提取:
培养细胞:先收集或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照或细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次); 8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。