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稳定细胞株筛选的两种方法步骤
日期：2025-04-27 14:03
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摘要：
稳定细胞株的筛选需要经过一系列的步骤和实验，下面介绍一下稳定细胞株筛选的两种方法步骤：
一、质粒转染法：
先把质粒整合到染色体上后，用相应的质粒DNA中的抗性标志来筛选该细胞系，单克隆筛选稳定细胞株；
1、筛选浓度测定，以10~14 天细胞全部死亡的抗生 素浓度为筛选浓度；
2、进行细胞接种，转染实验前天接种细胞，各种细胞的平板密度依据各种细胞的生长率和细胞形状而定。进行转染当天细胞密度应达到60%~80% 覆盖；
3、进行细胞转染；
4、利用质粒上含有的抗性选...
稳定细胞株的筛选需要经过一系列的步骤和实验，下面介绍一下稳定细胞株筛选的两种方法步骤：
一、质粒转染法：
先把质粒整合到染色体上后，用相应的质粒DNA中的抗性标志来筛选该细胞系，单克隆筛选稳定细胞株；
1、筛选浓度测定，以10~14 天细胞全部死亡的抗生 素浓度为筛选浓度；
2、进行细胞接种，转染实验前天接种细胞，各种细胞的平板密度依据各种细胞的生长率和细胞形状而定。进行转染当天细胞密度应达到60%~80% 覆盖；
3、进行细胞转染；
4、利用质粒上含有的抗性选择进行筛选，并鉴定筛选结果。
二、慢病毒转染法：
应用逆转录病毒，慢病毒转染，筛选稳定细胞株。慢病毒可以携带外源基因随机整合进基因组。转染得到稳定细胞株的效率高，是建立稳定株的比较不错的方式。
1、将人源化的抗体基因转接到慢病毒载体上，
2、使用包装细胞，一般为293细胞，包装出病毒，不同类型病毒包装时间一般在3-5天。
3、用病毒转染目的细胞。包装好的病毒要先测滴度，根据滴度决定转染目的细胞的病毒量。
4、后期筛选。转染目的细胞1-2天后加抗生 素筛选得到稳定细胞株。