半贴壁半悬浮细胞传代(以一个T25瓶为例)
1、 培养液(含悬浮的细胞):用移液器吸出培养液转移到无菌离心管中;
2、 贴壁部分:用1ml PBS洗细胞,吸出PBS放入到第1步装有培养液的离心管中收集(不要直接丢弃,里面有细胞);
3、 培养瓶加入胰酶1ml,放入培养箱静置消化;
4、 消化时间跟据细胞特性有所不同,显微镜下看到细胞明显收缩变圆,侧立培养瓶细胞可以滑落时可终止消化,全程不要拍打培养瓶;
5、 用3ml含血清的培养基终止消化,将消化下来的细胞悬液吹散细胞后收集到第1步的离心管;
6、 将离心管在1200rpm(约250g) 3min离心,离心完毕弃掉上清,加入新的培养基重悬,按实际情况分瓶,放入培养箱培养。