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细胞传代操作步骤

细胞传代操作步骤:

细胞密度达到80-90%时即可传代。

1、弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次;

2、加入2ml0.25%(T25瓶),使覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化;

3、1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止;

4、将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清;

5、用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基;

6、悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。