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紫外光吸收法测定蛋白浓度试验程序

紫外光吸收法测定蛋白浓度：
1．用品和仪器：紫外分光光度剂，微量自动取液仪。
2．试剂：标准蛋白质溶液：准确称重的纯净蛋白质，配成1mg/ml储液置于4度中备用。
0.1mol/l磷酸缓冲液，PH7.4;0.1mol/l磷酸缓冲液，PH12.0。
3.试验程序：
1），在2个洁净干净的石英比色杯中（内径1cm）中加入蒸馏水或其他用于溶解标准蛋白质与待测样品的缓冲液，其中一个作为参比杯（在以后测量不变），另一个作为样品杯，放入分光光度剂的相应位置。
2），记录下空白杯在280260nm处的光吸收值，或对之进行250－350nm波长范围的基线扫描。
3），移去样品比色杯中的蒸馏水或是缓冲液，干燥比色杯（用滤纸吸取残液）。
4），在样品比色杯中加入待测样品液，在实验中提取样品30ul加入2970ul双证水，混匀，样品液事先通过离心或用0.2um孔径的滤膜过滤。
5），重复2步骤
6），蛋白含量计算：蛋白浓度（mg/ml）=1。55A280—0.76A260

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