质粒抽提步骤:
Ⅰ.使用质粒提取试剂盒提取质粒时请参考具体试剂盒的操作说明。如Omega公司的E.Z.N.A.® Plasmid Mini Kit I, Q(capless) Spin (质粒提取盒)。
Ⅱ.碱裂解手提法:此方法适用于小量质粒DNA的提取,提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析。方法如下:
1:接1%含质粒的大肠杆菌细胞于2mlLB培养基。
2:37℃振荡培养过夜。
3:取1.5ml菌体于Ep管(离心管),以4000rpm离心3min,弃上清液。
4:加0.lml溶液I(1%葡萄糖,50mM/LEDTApH8.0,25mM/LTris-HClpH8.0)充分混合。
5:加入0.2ml溶液II(0.2mM/LNaOH,1%SDS),轻轻翻转混匀,置于冰浴5min.
6:加入0.15m1预冷溶液III(5mol/LKAc,pH4.8),轻轻翻转混匀,置于冰浴5min.
7:以10,000rpm离心20min,取上清液于另一新Ep管
8:加入等体积的异丙醇,混匀后静置10min.
9:以10,000rpm离心20min,弃上清。
10:用70%乙醇0.5ml洗涤一次,抽干所有液体。
11:待沉淀干燥后,溶于50ulTE缓冲液中(或60℃温育去离子水).