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质粒抽提操作步骤
日期：2025-04-23 05:10
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摘要：
质粒抽提步骤:
Ⅰ.使用质粒提取试剂盒提取质粒时请参考具体试剂盒的操作说明。如Omega公司的E.Z.N.A.® Plasmid Mini Kit I, Q(capless) Spin (质粒提取盒)。
Ⅱ.碱裂解手提法:此方法适用于小量质粒DNA的提取，提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析。方法如下:
1:接1%含质粒的大肠杆菌细胞于2mlLB培养基。
2:37℃振荡培养过夜。
3:取1.5ml菌体于Ep管(离心管)，以4000rpm离心3min，弃上清液。...
质粒抽提步骤:
Ⅰ.使用质粒提取试剂盒提取质粒时请参考具体试剂盒的操作说明。如Omega公司的E.Z.N.A.® Plasmid Mini Kit I, Q(capless) Spin (质粒提取盒)。
Ⅱ.碱裂解手提法:此方法适用于小量质粒DNA的提取，提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析。方法如下:
1:接1%含质粒的大肠杆菌细胞于2mlLB培养基。
2:37℃振荡培养过夜。
3:取1.5ml菌体于Ep管(离心管)，以4000rpm离心3min，弃上清液。
4:加0.lml溶液I(1%葡萄糖，50mM/LEDTApH8.0，25mM/LTris-HClpH8.0)充分混合。
5:加入0.2ml溶液II(0.2mM/LNaOH，1%SDS)，轻轻翻转混匀，置于冰浴5min.
6:加入0.15m1预冷溶液III(5mol/LKAc，pH4.8)，轻轻翻转混匀，置于冰浴5min.
7:以10，000rpm离心20min，取上清液于另一新Ep管
8:加入等体积的异丙醇，混匀后静置10min.
9:以10，000rpm离心20min，弃上清。
10:用70%乙醇0.5ml洗涤一次，抽干所有液体。
11:待沉淀干燥后，溶于50ulTE缓冲液中(或60℃温育去离子水).