1、胰酶消化过度
在用胰酶消化细胞使其不贴壁的时候，如果消化时间过长，会导致细胞膜表面蛋白也被破话，严重者可致细胞破碎、死亡。所以胰酶消化不宜过久。如果消化了好久（具体消化时间视细胞而定）在镜下看还有很多细胞贴壁，可能是胰酶消化力弱。增强胰酶消化能力的方法：消化前用PBS洗以去除血清中的各种蛋白；在胰酶中加入EDTA；在消化前胰酶37摄氏度预热。
2、传代比例太低
细胞在培养基中生长的时候，除了外源营养物质，其自身也会分泌促进生长的物质。如果一个皿中细胞数量太少，细胞分泌的营养物质支撑不了“一大家子”的细胞，细胞状态就不好。不要因为偷懒而减少传代比例，以及细胞悬液要吹打均匀让传代的细胞就是你要的比例。
3、污染
在（xi 菌或真jun）污染的早期，还未出现明显的细胞外形被严重破坏、培养基变黄的时候，细胞可能出现大量死亡、形状怪异、有大团细胞簇拥的现象。这时候你再养一两天，就能看到细胞变成马赛克（xi 菌污染）或者培养基肉眼可见浑浊有絮絮（真jun污染）。