TRIZ0L试剂中的主要成分为异硫氰酸胍和苯酚,其中异硫氰酸胍可裂解细胞,促使核蛋白体的解离,使RN与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。当加入氯仿时,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA进入水相,离心后可形成水相层和有机层,这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层(无色)主要为RNA,有机层(黄色)主要为DNA和蛋白质。
步骤:
1、细胞或组织,加入0.4ml TRIZOL试剂后匀浆。
2、室温静置5分钟。
3、加入1/5 TRIZOL试剂体积量的氯仿,剧烈震荡混匀。
4、室温静置5分钟,12000g 4℃离心15分钟。
5、将上清液转移至新的离心管中,加入与上清液等体积的异丙醇,颠倒混匀。
6、室温静置10分钟,12000g 4℃离心10分钟,弃上清。
7、向沉淀中加入1ml的75%乙醇的清洗沉淀,12000g 4℃离心5分钟。
8、弃上清保留沉淀,干燥。
9、沉淀物溶解于11μl的DEPC处理水中。