1、要注意避免出现严重溶血。血红蛋白中含有血红素基团，其有类似过氧化物的活性，因此，在以HRP为标记酶的ELISA试剂盒测定中，如血清标本中血红蛋白浓度较高，则其就很容易在温育过程中吸附于固相，从而与后面加入的HRP底物反应显色。
2、样本的采集及血清分离中要注意尽量避免xi菌污染，一则xi菌的生长，其所分泌的一些酶可能会对抗原抗体等蛋白产生分解作用；二则一些xi菌的内源性酶如大肠杆菌的β-半乳糖苷酶本身会对用相应酶作标记的测定方法产生非特异性干扰。
3、血清标本如是以无菌操作分离，则可以在2～8℃下保存一周，ELISA试剂盒如为有菌操作，则建议冰冻保存。样本的长时间保存，应在-70℃以下。
4、冰冻保存的血清标本须注意避免因停电等造成的反复冻融。ELISA试剂盒标本的反复冻融所产生的机械剪切力将对标本中的蛋白等分子产生破坏作用，从而引起假阴性结果。此外，冻融标本的混匀亦应注意，不要进行剧烈振荡，反复颠倒混匀即可。