禽呼肠孤病毒(ARV)试剂盒荧光-PCR法

产品特点: 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强

储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内**的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤高压。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
大鼠血小板衍生生长因子AB(PDGF-AB)试剂盒 Rat Platelet-Derived Growth Factor AB,PDGF-AB ELISA kit 青蒿酸(标准品)  Artemisic acid  质量规格：HPLC≥98%，标准品

大鼠血小板衍生生长因子B(PDGF-B)试剂盒 Rat platelet-derived growth factor-B,PDGF-B ELISA Kit 防己诺林碱  Fangchinoline  质量规格：HPLC≥98%，标准品

大鼠血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)试剂盒 Rat platelet-derived growth factor-BB,PDGF-BB ELISA Kit 澳茄新碱  Solasurine  质量规格：HPLC≥98%，标准品

大鼠血小板衍生生长因子可溶性受体α(PDGFsR-α)试剂盒 Rat Platelet-Derived Growth Factor Soluble Receptor α,PDGFsR-α ELISA kit 五水合硫酸金雀花碱/硫酸鹰爪豆碱(标准品)  Sparteini Sulfas  质量规格：HPLC≥98%，标准品

大鼠血小板因子3(PF-3)试剂盒 Rat platelet factor 3,PF-3 ELISA kit 五水合硫酸金雀花碱/硫酸鹰爪豆碱  (-)-Sparteini Sulfas  质量规格：≥97%,BR

大鼠血小板因子4(PF-4/CXCL4)试剂盒 Rat Platelet Factor 4,PF-4 ELISA Kit 辛弗林(标准品)  Synephrine  质量规格：HPLC≥98%，标准品

大鼠循环复合物(CIC)试剂盒 Rat circulating immune complex,CIC ELISA Kit 辛弗林  Synephrine  质量规格：>98%,BR

大鼠牙本质0蛋白(DPP)试剂盒 Rat dein phosphoproteins,DPP ELISA kit 辛弗林盐酸盐  Synephrine HCl  质量规格：HPLC≥98%，标准品

大鼠牙本质基质蛋白1(DMP1)试剂盒 Rat Dein Maix Protein 1,DMP1 ELISA Kit 三尖杉宁碱(标准品）  Cephalomannine  质量规格：HPLC≥98%，标准品

大鼠烟酰胺腺嘌呤二核苷酸0酸(NADPH)ELISA检测试剂盒Ratnicotinamideadeninedinucleotidephosphate,NADPH 96T/48T 吉莫斯特;吉美嘧啶(标准品)  Gimeracil  质量规格：>99%,标准品
防己诺林碱  Fangchinoline  质量规格：HPLC≥98%，标准品 大鼠血小板衍生生长因子B(PDGF-B)试剂盒 Rat platelet-derived growth factor-B,PDGF-B ELISA Kit

澳茄新碱  Solasurine  质量规格：HPLC≥98%，标准品 大鼠血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)试剂盒 Rat platelet-derived growth factor-BB,PDGF-BB ELISA Kit

五水合硫酸金雀花碱/硫酸鹰爪豆碱(标准品)  Sparteini Sulfas  质量规格：HPLC≥98%，标准品 大鼠血小板衍生生长因子可溶性受体α(PDGFsR-α)试剂盒 Rat Platelet-Derived Growth Factor Soluble Receptor α,PDGFsR-α ELISA kit

禽呼肠孤病毒(ARV)试剂盒荧光-PCR鼠解整合素样金属蛋白酶8(ADAM8)ELISA试剂盒 ，英文名： ADAM8 ELISA Kit L-正亮氨酸  L-Norleucine  质量规格：>98%,BR

大鼠胃肠癌标志物CA199ELISA检测试剂盒RatGasoiestinalcancerMarker-CA199ELISAKit 96T/48T Fmoc-D-4-苯丙氨酸  Fmoc-4-iodo-D-Phe-OH  质量规格：HPLC>98%

人促酰化蛋白(ASP)试剂盒 Human acylation stimulating protein,ASP ELISA Kit 3,5-二-L-酪氨酸  3,5-Diiodo-L-tyrosine  质量规格：BR，98%

RatSerumamyloidA,SAAELISAKit大鼠血清淀粉样蛋白A(SAA)ELISA试剂盒规格：96T/48T L-焦谷氨酸;氧脯氨酸  H-Pyr-OH  质量规格：>98%,BR

HRP标记二抗(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)100微升 CBZ-L-焦谷氨酸  Z-Pyr-OH  质量规格：>98%,BR

Mouseα1-Acidglycoprotein,α1-AGPELISA试剂盒小鼠α1酸性糖蛋白(α1-AGP)ELISA试剂盒规格：96T/48T DL-m-酪氨酸  DL-m-Tyrosine  质量规格：0.98

小鼠解整合素金属蛋白酶9(ADAM9)ELISA试剂盒 ，英文名： ADAM9 ELISA Kit 肌氨酸甲酯盐酸盐  H-Sar-OMe·HCl  质量规格：BR,98%

人α半乳糖基抗体(Gal)ELISA检测试剂盒Humanα-galactoyl,GalELISAKit 96T/48T L-异亮氨醇   L-Isoleucinol  质量规格：>97%,BR

大鼠血管内皮细胞生长因子(VEGF)试剂盒 Rat Vascular Endothelial cell Growth Factor,VEGF ELISA Kit L-亮氨醇   L-Leucinol  质量规格：>97%,油状

英文名称RatFree-TestoteroneELISAKit大鼠游离睾同(Free-Testoterone)规格：96T/48T N-Boc-L-亮氨醇   Boc-Leucinol  质量规格：>98%,BR
SV-HUC-1人输尿管上皮永生化细胞 SV-HUC-1 human ureter epithelial immortalized cell F12K培养基+10%FBS支链淀粉100克

TNFSF8 Protein Human 重组人 CD153 / CD30L / TNFSF8 蛋白 (Fc 标签)2，5-二本基噁坐 2,5-Diphqnyloxczolq 9-71-7

大鼠背部脊髓神经元(RDSCI)(1×106) Hela, 人细胞系 Human叶绿素铜钠盐25克

斑马鱼尾鳍细胞;AB.9铝酸钠100克

BTN3A3 Others Human 人 BTN3A3 人细胞裂解液 (阳性对照) 618-36-0本DL-alpha-metxylbenzylamine
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。