猪肺炎支原体(MHP)试剂盒荧光-PCR法

产品特点: 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断
灵敏度高：可检测个位拷贝数的基因
特异性高：有效避免非特异性扩增的出现
稳定性高：复孔间差异小，实验结果重复性强
扩增性能优：扩增效率高，荧光信号强

储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内**的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

PCR实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。zui好设立一个专用的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤高压。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
DNA产物去铁化试剂盒20 富马酸 HPLC≥98% 20mg

DNA橙(acridineorange)荧光检测试剂盒50 覆盆子酮 HPLC≥98% 20mg

DNA定向连接克隆完全试剂盒(包括双内切酶)10 覆盆子酮葡萄糖苷 HPLC≥98% 20mg

DNA合成1样本 伽升沃 C HPLC≥98% 20mg

DNA甲基转移酶(DNMT)总活性酶连续循环比色法定量检测试剂盒20 伽升沃 D HPLC≥98% 20mg

DNA甲基转移酶-1(DNMT-1)活性酶连续循环比色法定量检测试剂盒20 甘草查尔酮A HPLC≥98% 20mg

DNA甲基转移酶-3A(DNMT-3A)活性酶连续循环比色法定量检测试剂盒20 甘草查尔酮B HPLC≥98% 10mg

DNA甲基转移酶-3B(DNMT-3B)活性酶连续循环比色法定量检测试剂盒20 甘草查尔酮C HPLC≥98% 20mg

DNA末端平滑补缺同位素([35S]dATP)聚合酶标记试剂盒20 甘草酸(β型）  HPLC≥98% 20mg

DNA南方杂交印迹消除试剂盒20 甘草酸十八酯 HPLC≥98% 20mg
富马酸 HPLC≥98% 20mg DNA产物去铁化试剂盒20

覆盆子酮 HPLC≥98% 20mg DNA橙(acridineorange)荧光检测试剂盒50

覆盆子酮葡萄糖苷 HPLC≥98% 20mg DNA定向连接克隆完全试剂盒(包括双内切酶)10

伽升沃 C HPLC≥98% 20mg DNA合成1样本

伽升沃 D HPLC≥98% 20mg DNA甲基转移酶(DNMT)总活性酶连续循环比色法定量检测试剂盒20

甘草查尔酮A HPLC≥98% 20mg DNA甲基转移酶-1(DNMT-1)活性酶连续循环比色法定量检测试剂盒20

甘草查尔酮B HPLC≥98% 10mg DNA甲基转移酶-3A(DNMT-3A)活性酶连续循环比色法定量检测试剂盒20

甘草查尔酮C HPLC≥98% 20mg DNA甲基转移酶-3B(DNMT-3B)活性酶连续循环比色法定量检测试剂盒20

甘草酸(β型）  HPLC≥98% 20mg DNA末端平滑补缺同位素([35S]dATP)聚合酶标记试剂盒20

甘草酸十八酯 HPLC≥98% 20mg DNA南方杂交印迹消除试剂盒20
人单胺氧化酶(MAO)试剂盒 Human monoamine oxidase,MAO ELISA Kit L-谷氨酸盐酸盐  L-Glutamic acid   质量规格：>99%,BR

RatProstaglandinF2α,PGF2αELISAKit大鼠前列腺素F2α(PGF2α)ELISA试剂盒规格：96T/48T N'-硝基-L-精氨酸(L-NNA)  Nω-Nitro-L-arginine  质量规格：>98%,BR

Hexamer(随机引物)(200纳克/微升)100微升 Nα-苯甲酰-L-精氨酸  Nalpha-Benzoyl-L-arginine  质量规格：>98%,BR

MouseTumornecrosisfactorβ,TNF-βELISA试剂盒小鼠肿瘤坏死因子β(TNF-β)ELISA试剂盒规格：96T/48T L-天冬酰胺，无水物（标准品）  L-Asparagine Anhydrous  质量规格：HPLC≥98%，标准品

小鼠抗α-胞衬蛋白抗体IgG/IgA(α-Fodrin IgG/IgA)ELISA试剂盒 ，英文名： α-Fodrin IgG/IgA ELISA Kit L-天冬素/L-天冬酰胺  L-Asparagine anhydrous  质量规格：>99%,BR,无水物

大鼠相关血浆蛋白A(PAPP-A)ELISA检测试剂盒RatpregnancyassociatedplasmaproteinA,PAPP-AELISAKit 96T/48T N'-（三苯甲基）-L-天冬酰胺  N'-Trityl-L-asparagine  质量规格：>98%,BR

人带3蛋白(Band3)试剂盒 Human Band3 protein ELISA kit L-天冬氨酸-1-苄酯  L-Aspartic Acid 1-Benzyl Ester  质量规格：>98%,BR

Ratprostatespecificaigen,PSAELISAKit大鼠前列腺特异性抗原(PSA)ELISA试剂盒规格：96T/48T L-天门冬氨酸1-甲酯  L-Aspartic acid 1-methyl ester  质量规格：>98%,BR

HHV6(HUMANHERPESVIRUS6)病毒标准曲线定量PCR扩增检测试剂盒2 L-天冬氨酸-β-甲酯盐酸盐  L-Aspartic acid β-methyl ester   质量规格：0.98

MouseTumorSpecificGrowthFacter/tumorsuppliedgroupoffactor,TGSFELISA试剂盒小鼠肿瘤特异生长因子/肿瘤相关因子(TGSF)ELISA试剂盒规格：96T/48T S-甲基-L-半胱氨酸  S-Methyl-L-cysteine  质量规格：98%，进口分包
472-11-7鲁斯可皂苷元规格   Ruscogenin  格兰-韦革氏(Gram-Weige)染色试剂盒50

471-95-4蟾毒它灵厂家  Bufotalin   NADPH氧化酶活性比色法定量检测试剂盒20(10样本)

471-66-9α-乳香酸厂家  α-Boswellic acid   /酵母总巯基含量比色法定量检测试剂盒20

470-37-1华蟾毒精品牌  Cinobufagin   /酵母腺苷酸激酶(Adenylatekinase)活性酶连续循环比色法定量检测试剂盒20

470-37-1华蟾毒精厂家  Cinobufagin   /酵母纤维素酶(cellulase)活性比色法定量检测试剂盒20
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
猪肺炎支原体(MHP)试剂盒荧光-PCR法设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

产品留言

标题

联系人

联系电话

内容

验证码

点击换一张

注：1.可以使用快捷键Alt+S或Ctrl+Enter发送信息!
2.如有必要,请您留下您的详细联系方式!