实验要点:
1.产品名称如在反应混合液中有叠氮钠或游离氨基存在,会抑制标记反应。因此,蛋白质在反应前要对 0.1mol/L碳酸氢钠缓冲液或0.5mol/L硼酸缓冲液充分透析;
2.所用的NHSB及待生物素化蛋白质之间的分子比按蛋白质表面的ε-氨基的密度会有所不同,选择不当则影响标记的效率,应先用几个不同的分子比来筛选适条件;
3.用NHSB量过量也是不利的,抗原的结合位点可能因此被封闭,导致抗体失活;
4.由于抗体的氨基不易接近可能造成生物素化不足,此时可加入去污剂如 Triton x-100, Tween20等;
5.当游离ε-氨基(赖氨酸残基的氨基)存在于抗体的抗原结合位点时,或位于酶的催化位点时,生物素化会降低或损伤抗体蛋白的结合力或活性;
6.生物素还可能与不同的功能基团,如羰基、氨基、巯基、异咪唑基及苯酚基,也可与糖基共价结合;
7.交联反应后,应充分透析,否则,残余的生物素会对生物素化抗体与亲和素的结合产生竞争作用;
8.在细胞的荧光标记实验中,中和亲和素的本底低,但由于链霉亲和素含有少量正电荷,故对某些细胞可导致高本底。
应用于IHC、WB、 IF、IP、ELISA等实验,质量保证,无效免费退换,另外本公司长期供应化抗体、WB抗体、化试剂盒和抗体试验所需全部相关试剂、荧光标记抗体、elisa抗体、单克隆抗体、多克隆抗体、各种标记的二抗IgG/IgM/IgD/IgA等科研实验抗体。
产品名称
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规格
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货号
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Anti-NRAS抗体
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0.1ml/100μg 0.2ml/200μg
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XG-01K85449
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英文名称 Anti-NRAS
中文名称 原癌基因N-Ras抗体
浓 度 1mg/1ml
规 格 0.1ml/100μg 0.2ml/200μg
抗体来源 Rabbit
克隆类型 polyclonal
交叉反应 Human, Mouse, Rat, Pig, Cow
产品类型 一抗
研究领域 肿瘤
蛋白分子量 predicted molecular weight: 21kDa
性 状 Lyophilized or Liquid
免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human N-Ras C-terminus
亚 型 IgG
纯化方法 affinity purified by Protein A
储 存 液 0.01M PBS, pH 7.4 with 10 mg/ml BSA and 0.1% Sodium azide
产品应用 WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IP=1:20-100 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 IF=1:100-500
别 名 GTPase NRas; OTTMUSP; ALPS4; AV095280; HRAS1; N ras; N ras protein part 4; Neuroblastoma RAS viral (v ras) oncogene homolog; NRAS1; OTTHUMP; Transforming protein N Ras; v ras neuroblastoma RAS viral oncogene homolog.
稀释方法:
方法1. 实验前,将冻干粉抗体用无菌蒸馏水稀释(或PBS稀释),将稀释后的抗体分装5-10支(20ulx5支或10ulx10支),放入-20℃保存,用一支拿一支,避免反复冻溶。
方法2. 实验前,也可将冻干粉抗体用无菌蒸馏水稀释50ul(或PBS稀释50ul)成原液:再加50%甘油, 放入-20℃保存,用多少吸多少。
方法3. 预试验可做几个梯度1:100、200、400背景高还可做上去,选一个好的稀释比例,再正式做,工作液的稀释-使用抗体稀释液。
石蜡切片和冰冻切片的比较
(1)要求做冰冻切片的不一定能做石蜡切片,这是今天我向一老师请教得出的结论。因为作石蜡切片时要高温烤片,可能会破坏组织的抗原 性,如果组织的抗原性较稳定,则可作石蜡切片;但是要求做石蜡切片的,可作冰冻切片。
(2)冰冻切片的优点是能够较好的保存组织的抗原活性,做化 时不需抗原修复这一步。缺点是细胞内易形成冰晶而破坏细胞结构,可能会使抗原弥散;切片厚度较石蜡的厚,做的片子没石蜡的漂亮。当你买一抗时,目录上都写着做什么样的切片,如果它写着只能做冰冻,就不能做石蜡,如写着两者都可,那就都能做。
(3)石蜡切片的优点可以保持组织细胞的形态结构,且容易存放在室温,而冰冻切片比较麻烦,一定要存在-80度的低温冰箱中,尤其是用来做原位杂交 的的切片,为了防止RNA降解,保存一贯很重要。由于石蜡切片可以切到4微米左右,所以原位杂交探针容易渗透到组织中去,容易成功,而且得到的颜色/形态都较冰冻切片好。
抗体的鉴定:产品仅用于科研
1)抗体的效价鉴定:不管是用于诊断还是用于制备抗体的目的都是要求较高效价。不同的抗原制备的抗体,要求的效价不一。鉴定效价的方法很多,包括有试管凝集反应,琼脂扩散试验,酶联吸附试验等。常用的抗原所制备的抗体一般都有约成的鉴定效价的方法,以资比较。如制备抗抗体的效价,一般就采用琼脂扩散试验来鉴定。
2)抗体的特异性鉴定:抗体的特异性是指与相应抗原或近似抗原物质的识别能力。抗体的特异性高,它的识别能力就强。衡量特异性通常以交叉反应率来表示。交叉反应率可用竞争抑制试验测定。以不同浓度抗原和近似抗原分别做竞争抑制曲线,计算各自的结合率,求出各自在IC50时的浓度,并按公式计算交叉反应率。
如果所用抗原浓度IC50浓度为pg/管,而一些近似抗原物质的IC50浓度几乎是无穷大时,表示这一抗血清与其他抗原物质的交叉反应率近似为0,即该血清的特异性较好。
3)抗体亲和力:是指抗体和抗原结合的牢固程度。亲和力的高低是由抗原分子的大小,抗体分子的结合位点与抗原决定簇之间立体构型的合适度决定的。有助于维持抗原抗体复合物稳定的分子间力有氢键,疏水键,侧链相反电荷基因的库仑力,范德华力和空间斥力。亲和力常以亲和常数K表示,K的单位是L/mol。抗体亲和力的测定对抗体的筛选,确定抗体的用途,验证抗体的均一性等均有重要意义。
Donkey Anti-Goat IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555标记的驴抗羊IgG 0.1ml
GLT28D1 英文名称: 糖基转移酶28家族1抗体 0.2ml
Rhesus antibody Rh ASF1A 细胞衰老相关蛋白ASF1A抗体 规格 0.1ml
Anti-HSP-47/FITC 荧光素标记热休克蛋白-47蛋白抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-mouse IgG/Cy3 Cy3标记的兔抗小鼠IgG 规格 0.1ml
Anti-Phospho-Pin1 (Ser16)/FITC 荧光素标记0酸化肽基脯氨酞顺反异构酶Pinl抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
人转化生长因子β2(TGF-β2)酶联吸附测定试剂盒 别称:TGFB2, LDS4, TGF-beta2, transforming growth factor beta 2, G-TSF Human TGF-β2(Transforming Growth Factor Beta 2) ELISA Kit 用途 该试剂盒用于体外定量检测人血清、血浆或其他相关生物液体中天然及部分重组TGF-β2浓度。
Mouse Anti-rabbit IgG 小鼠抗兔IgG 1mg
FGFR2 英文名称: 成纤维细胞生长因子受体2抗体 0.1ml
热休克蛋白90α抗体 Anti-HSP-90α 0.1ml
Anti-PMP2 /FITC 荧光素标记周围神经髓鞘蛋白2抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-Rb(Ser788) 0酸化视网膜母细胞瘤相关蛋白1抗体 规格 0.1ml
Goat Anti-Mouse IgG Whole
Anti-NRAS抗体细胞αSMA蛋白表达流式细胞仪检测试剂盒 10/20次
载玻片细胞αSMA蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒 10/20次
冰冻切片组织αSMA蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒 10/20次
石蜡切片组织αSMA蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒 10/20次
载玻片细胞αSMA蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒 10/20次
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