Anti-Notch1/MOTC抗体

实验要点：
1.产品名称如在反应混合液中有叠氮钠或游离氨基存在,会抑制标记反应。因此,蛋白质在反应前要对 0.1mol/L碳酸氢钠缓冲液或0.5mol/L硼酸缓冲液充分透析；
2.所用的NHSB及待生物素化蛋白质之间的分子比按蛋白质表面的ε-氨基的密度会有所不同,选择不当则影响标记的效率,应先用几个不同的分子比来筛选适条件；
3.用NHSB量过量也是不利的,抗原的结合位点可能因此被封闭,导致抗体失活；
4.由于抗体的氨基不易接近可能造成生物素化不足,此时可加入去污剂如 Triton x-100, Tween20等；
5.当游离ε-氨基(赖氨酸残基的氨基)存在于抗体的抗原结合位点时,或位于酶的催化位点时,生物素化会降低或损伤抗体蛋白的结合力或活性；
6.生物素还可能与不同的功能基团,如羰基、氨基、巯基、异咪唑基及苯酚基,也可与糖基共价结合；
7.交联反应后,应充分透析,否则,残余的生物素会对生物素化抗体与亲和素的结合产生竞争作用；
8.在细胞的荧光标记实验中,中和亲和素的本底低,但由于链霉亲和素含有少量正电荷,故对某些细胞可导致高本底。

应用于IHC、WB、 IF、IP、ELISA等实验，质量保证，无效免费退换，另外本公司长期供应化抗体、WB抗体、化试剂盒和抗体试验所需全部相关试剂、荧光标记抗体、elisa抗体、单克隆抗体、多克隆抗体、各种标记的二抗IgG/IgM/IgD/IgA等科研实验抗体。

英文名称  Anti-Notch1/MOTC
中文名称  跨膜受体蛋白Notch-1抗体
浓    度  1mg/1ml
规 格  0.1ml/100μg 0.2ml/200μg
抗体来源  Rabbit  
克隆类型  polyclonal
交叉反应  Human, Mouse, Rat
产品类型    一抗
研究领域    细胞生物 发育生物学 神经生物学 信号转导 干细胞 表观遗传学
蛋白分子量  predicted molecular weight: 270kDa
性    状  Lyophilized or Liquid
免 疫 原  KLH conjugated synthetic peptide derived from human Notch1 C-terminus
亚    型  IgG
纯化方法  affinity purified by Protein A
储 存 液  0.01M PBS, pH 7.4 with 10 mg/ml BSA and 0.1% Sodium azide
产品应用    WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IP=1:20-100 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 IF=1:100-500
别    名  hN1; Lin-12; LIN12; MIS6; Motch A; mT14; Neurogenic locus notch homolog protein 1; Neurogenic locus notch protein homolog; NICD; Notch1 intracellular domain; NOTC1_HUMAN Notch 1; Notch 1 extracellular truncation; Notch 1 intracellular domain; NOTCH; Notch gene homolog 1 (Drosophila); Notch homolog 1 translocation associated (Drosophila); Notch homolog 1, translocation-associated (Drosophila); NOTCH, Drosophila, homolog of, 1; notch1; p300; TAN 1; TAN1; TAN1; Translocation Associated Notch Homolog; Translocation Associated Notch Homolog; Translocation associated notch protein TAN 1; Translocation-associated notch protein TAN-1.

稀释方法：
方法1. 实验前，将冻干粉抗体用无菌蒸馏水稀释（或PBS稀释），将稀释后的抗体分装5-10支（20ulx5支或10ulx10支），放入-20℃保存，用一支拿一支，避免反复冻溶。
方法2. 实验前,也可将冻干粉抗体用无菌蒸馏水稀释50ul（或PBS稀释50ul）成原液:再加50%甘油, 放入-20℃保存，用多少吸多少。
方法3. 预试验可做几个梯度1：100、200、400背景高还可做上去，选一个好的稀释比例，再正式做，工作液的稀释-使用抗体稀释液。
石蜡切片和冰冻切片的比较
(1)要求做冰冻切片的不一定能做石蜡切片，这是今天我向一老师请教得出的结论。因为作石蜡切片时要高温烤片，可能会破坏组织的抗原 性，如果组织的抗原性较稳定，则可作石蜡切片;但是要求做石蜡切片的，可作冰冻切片。
(2)冰冻切片的优点是能够��好的保存组织的抗原活性，做化 时不需抗原修复这一步。缺点是细胞内易形成冰晶而破坏细胞结构，可能会使抗原弥散;切片厚度较石蜡的厚，做的片子没石蜡的漂亮。当你买一抗时，目录上都写着做什么样的切片，如果它写着只能做冰冻，就不能做石蜡，如写着两者都可，那就都能做。
(3)石蜡切片的优点可以保持组织细胞的形态结构，且容易存放在室温，而冰冻切片比较麻烦，一定要存在-80度的低温冰箱中，尤其是用来做原位杂交 的的切片，为了防止RNA降解，保存一贯很重要。由于石蜡切片可以切到4微米左右，所以原位杂交探针容易渗透到组织中去，容易成功，而且得到的颜色/形态都较冰冻切片好。

抗体的鉴定：产品仅用于科研
1）抗体的效价鉴定：不管是用于诊断还是用于制备抗体的目的都是要求较高效价。不同的抗原制备的抗体,要求的效价不一。鉴定效价的方法很多,包括有试管凝集反应,琼脂扩散试验,酶联吸附试验等。常用的抗原所制备的抗体一般都有约成的鉴定效价的方法,以资比较。如制备抗抗体的效价,一般就采用琼脂扩散试验来鉴定。
2）抗体的特异性鉴定：抗体的特异性是指与相应抗原或近似抗原物质的识别能力。抗体的特异性高,它的识别能力就强。衡量特异性通常以交叉反应率来表示。交叉反应率可用竞争抑制试验测定。以不同浓度抗原和近似抗原分别做竞争抑制曲线,计算各自的结合率,求出各自在IC50时的浓度,并按公式计算交叉反应率。 
如果所用抗原浓度IC50浓度为pg/管,而一些近似抗原物质的IC50浓度几乎是无穷大时,表示这一抗血清与其他抗原物质的交叉反应率近似为0,即该血清的特异性较好。
3）抗体亲和力：是指抗体和抗原结合的牢固程度。亲和力的高低是由抗原分子的大小,抗体分子的结合位点与抗原决定簇之间立体构型的合适度决定的。有助于维持抗原抗体复合物稳定的分子间力有氢键,疏水键,侧链相反电荷基因的库仑力,范德华力和空间斥力。亲和力常以亲和常数K表示,K的单位是L/mol。抗体亲和力的测定对抗体的筛选,确定抗体的用途,验证抗体的均一性等均有重要意义。

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