4CN显色试剂盒100ml

产品属性：

产品名称：4CN显色试剂盒

规格：100ml

货号：XG-RY2485

储存条件：4℃,避光,6个月

用途：Western Blot,**组织化学,用于检测过氧化物酶的活性

注意事项：4CN中文名称为4-氯-1-萘酚,是过氧化物酶的发色底物,形成蓝紫色不溶性产物。主要由4CN和氧化剂、TBS组成。
公司产品仅供科研实验、不得临床。

标准溶液配制：
1。先將PH7.00同PH4.00藥粉分別倒入250毫升蒸餾水中，充分溶解，用兩支玻璃瓶密封保存，做 好標簽。
2 。在校正前，準備ORP標準溶液。
3 。86毫伏：取50至100毫升PH7.00標準溶液置入一玻璃杯中，再加入稍許醌氫醌，充分攪拌。
4 。256毫伏：取50至100毫升PH4.00標準溶液置入一玻璃杯中，再加入稍許醌氫醌，充分攪拌。 5。 ORP標準液保存期為72hour。
标准品五大类：
1、化学成分类：标准物质，纯的化合物或是有代表性的基体样品，天然的或添加(被)分析物的(如，用作农药残留分析的添加了杀虫剂的动物脂肪)，以一种或多种化学或物理化学特性值表征。
2、生物和临床特性类：与目录A相似的标准物质，但以一种或多种生化或临床特性值表征，如酶活性。
3、物理特性类：以一种或多种物理特性值表征的标准物质，如熔点、粘性和密度。
4、工程特性类：以一种或多种工程特性值表征的标准物质，如硬度、拉伸强度和表面特性。
5、其他特性。这些类别又被细分为三级子类，例如，在化学成分类中，以微量锰、硅、铜、镍和铬含量表征的铝合金，列于化学成分一金属一有色金属一铝合金的子类中；在化学成分类别中，标准物质还可进一步被分为单一成分的标准物质和基体标准物质两大类；单一成分的标准物质是纯物质(元素或化合物)，或纯度、浓度、熔点、熔化焓值、粘度、紫外可见光吸光率、闪点等参考值已确定的纯物质的溶液；这类标准物质的重要用途之一是分析仪器的检定或校准。

溶液的配制与标定的实验原理：
1、用EDTA二钠盐配制EDTA标准溶液的原因；
EDTA是四元酸，是一种白色晶体粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室温溶解度为0.02g/100g H2O。
2、标定EDTA标准溶液的工作基准试剂，基准试剂的预处理：称量前一般应先用稀盐酸洗去氧化层，然后用水洗净，烘干。
注意事项：
①加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器 。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。

使用方法：
1.  常用筛选浓度
注意：用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线（kill curve），即剂量反应性曲线，来确定佳筛选浓度。
一般而言，哺乳动物细胞50-500μg/mL；植物细胞20-200μg/mL；300-1000μg/mL。
2. 杀灭曲线的建立
注意：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的浓度，可通过建立杀灭曲线（剂量反应曲线）来实现，至少选择5个浓度。
1）  未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜；注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。
2）  根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml，然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。
3）  替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度培养基。每个浓度做三个平行孔。
4）  接下来每3-4天更换新的含培养基。
5）  按照固定的周期（如每2天）进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数（通常是7-10天）内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
3.   稳定转染细胞的筛选
1）  转染48h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞（直接传代或者稀释后传代）。
注意：细胞处于活跃分裂状态时的杀伤。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，将细胞稀释至丰度不超过25%
2）   每隔3-4天更换含有的筛选培养液。
3）  筛选7天后观察并评估细胞克隆（集落）的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。
4） 挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含的筛选培养液维持培养7天。
5） 之后更换正常培养基培养即可。

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