操作步骤:
步骤1:配制程序冻存液,放在室温备用或放在4℃预冷
步骤2:离心收集对数生长期的细胞(贴壁细胞消化下来离心,悬浮细胞直接离心,转速1200rpm或250g,时间3min)
步骤3:用配制好的冻存液重悬细胞,按照1~1.5mL/管分装到冻存管中,拧紧管盖,做好标记
步骤4:冻存管放入冻存盒,冻存盒放入-80℃冰箱过夜(24h)
步骤5:冻存管从冻存盒取出,转移至液氮长期保存
方法二:使用无血清非程序冻存液
无血清非程序冻存液是一种商品化的冻存液,无需自己配制,无需降温盒,大大提升了便捷性。
但是,并非所有细胞都适用于这种冻存液,使用前必须做冻存测试,没问题后再批量应用。
细胞特性
产品名称
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MLTC-1小鼠睾丸间质细胞瘤细胞
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英文名称
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MLTC-1
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分类
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小鼠细胞系
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货号
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XG-X9228
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组织来源
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睾丸;Leydig细胞;Leydig细胞瘤
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形态
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上皮细胞样
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生长特性 贴壁细胞
细胞形态 上皮细胞样
生长培养基 RPMI-1640+10% FBS+1% P/S
冻存条件
冻存液:55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO
温度:液氮
培养条件
气相:空气,95%;CO2,5%
温度:37℃
推荐传代比例 1:3-1:4
推荐换液频率 2~3次/周
背景描述 MLTC-1细胞是从C57BL/6小鼠移植的M548OP Leydig细胞肿瘤中建立;MLTC-1细胞保留了原始肿瘤对激su的反应。在人绒毛膜促性腺激su(hCG)、黄体激su、霍乱毒su、和脒基-5'-亚氨基二磷酸盐处理下,MLTC-1细胞的膜腺苷酸环化酶活性提高;在hCG作用下,MLTC-1细胞还可**。
年龄(性别) 雄性
组织来源 睾丸;Leydig细胞;Leydig细胞瘤
细胞类型 肿瘤细胞
肿瘤类型 其它肿瘤细胞
生物等级 1
倍增时间 ~35-40小时
致瘤性 Yes, in C57BL/6 mice.
受体表达情况 chorionic gonadotropin;
luteinizing hormone (LH)
基因表达情况 progesterone
保藏机构 ATCC; CRL-2065
运输和保存
干冰运输及复苏好存活细胞
(1)1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。
(2)T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
细胞接收后的处理
1)收到细胞后,75%酒精瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。
2)请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。
3)贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后次传代建议T25培养瓶1:2传代 。
一.培养基及培养冻存条件准备
1) 准备1640(推荐iCell-0002)培养基;胎牛血清,10%;双抗,1%。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
细胞处理
1) 冻存细胞的复苏
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞传代可以参考以下方法
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3. 轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3)细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
公司正在出售的产品:
丝氨酸蛋白酶抑制剂B10抗体 Anti-SERPINB10
罗丹明标记的兔抗狗IgG H&L
Rabbit Anti-Dog IgG
H&L / RBITC
eIF2B蛋白抗体
PELO蛋白抗体
PELO
FLJ36492蛋白抗体
CCDC144B
转录中介因子Tif1γ抗体 Anti-TIF1 gamma/Trim33
凋亡相关蛋白6抗体 Anti-PDCD6/ALG2
磷酸化蛋白酪氨酸激酶9抗体 Anti-phospho-PTK9/TWF1(Tyr321)
eIF2B epsilon
ZSWIM3蛋白抗体 Anti-ZSWIM3
磷酸化酪氨酸激酶B抗体 Anti-phospho-TrkB (Tyr705)
磷酸化ras基因相关蛋白Rab24抗体 Anti-phospho-Rab24(Ser95)
碱性螺旋-环-螺旋转录因子SCXA抗体 Anti-SCXA/Scleraxis
大鼠Ⅲ型前胶原C端肽(PⅢCP)elisa生化检测试剂盒
MLTC-1小鼠睾丸间质细胞瘤细胞PⅢCP ELISA Kit
人钙卫蛋白elisa生化检测试剂盒
HumanCalprotectinELISAkit
鸡Toll样受体4(TLR4)elisa检测试剂盒
Hepatitis B
virus RFLP基因分析试剂盒
小鼠成纤维细胞生长因子6(FGF6)elisa检测试剂盒
大鼠CD44分子(CD44)elisa检测试剂盒
地中海热蛋白MEFV抗体
MEFV
1号染色体开放阅读框111抗体
C1ORF111
分子伴侣复合体TCP-1α抗体 Anti-TCP1 alpha
RAB3-GTP酶激活蛋白催化亚单位2抗体 Anti-RAB3GAP2
神经细胞正五聚体1抗体 Anti-NPTX1/NP1
VWCE抗体 Anti-VWCE
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