细胞特性
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产品名称 |
英文名称 |
MDBK:MDBK |
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分类 |
牛细胞系 |
货号 |
XG-X3761 |
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组织来源 |
肾；正常细胞 |
形态 |
上皮细胞样 |
细胞别称：MDBK (NBL-1); NBL-1; Madin-Darby Bovine Kidney; Madin Darby Bovine Kidney
种属来源：牛
年龄性别：雄；成年
组织来源：肾；正常细胞
生长特性：贴壁生长
细胞形态：上皮细胞样
背景简介：MDBK(NBL-1)细胞是由S·H·Madin和N·B·Darby在1957年2月18日从一只表观正常的成年牛肾脏建立的。1973年，这株MDBK(NBL-1)细胞被牛病毒性痢毒(BVDV)感染；1982年，发现了一株未被BVDV感染的MDBK(NBL-1)细胞株，此细胞初来自ATCC1967年7月第96代的冻存管。MDBK(NBL-1)细胞的后代经NVSL检测，未发现被任何病毒污染的证据。1982年8月，R·A·Van Deusen将MDBK(NBL-1)提供给ATCC时，已传代至第110代；MDBK(NBL-1)细胞未被BVDV感染。
生物等级：2
细胞规格：1×106cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装
支原体检测：无
基因表达情况：keratin
保藏机构：ATCC; CCL-22 ATCC; CRL-6071DSMZ; ACC-174 ECACC; 90050801
培养基：RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S
培养条件：气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃
冻存条件：无血清冻存液，液氮储存
运输和保存
干冰运输及复苏好存活细胞
（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。
细胞接收后的处理
1）收到细胞后，75%酒精瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。
2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。
3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后次传代建议T25培养瓶1：2传代 。
一．培养基及培养冻存条件准备
1） 准备1640（推荐iCell-0002）培养基；胎牛血清，10%；双抗，1%。
2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。
1） 冻存细胞的复苏
将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞传代可以参考以下方法
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。
3. 轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3）细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
公司正在出售的产品：
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着丝粒蛋白K/FKSG14抗体
JHDM1D蛋白抗体
JHDM1D
载脂蛋白L3抗体
APOL3
大鼠β-防御素(β-Defensins)elisa检测试剂盒
小鼠生长分化因子3(GDF3)elisa检测试剂盒
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尿皮质素抗体 Anti-Urocortin
原钙粘蛋白γA5抗体 Anti-PCDHGA5
原钙粘附蛋白α7抗体 Anti-PCDHA7
尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶抗体 Anti-UGDH/UDPGDH
Cy3标记的羊抗小鼠IgG H&L
MDBK牛肾细胞Goat Anti-Mouse IgG H&L / Cy3
锌指蛋白5抗体
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牛瘦素(LEP)elisa生化检测试剂盒
LEP ELISA Kit
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LH ELISA Kit
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HumanDFIgGELISAkit
体外非细胞系统细胞色素P450亚酶2A6（COUMARIN）活性
四、细胞凋亡整体解决方案——Apoptosis
大鼠磷酸化糖原合成酶激酶3(pGSK-3)elisa检测试剂盒
纯化线粒体蛋白质浓度定量测定试剂盒
操作步骤：
步骤1：配制程序冻存液，放在室温备用或放在4℃预冷
步骤2：离心收集对数生长期的细胞（贴壁细胞消化下来离心，悬浮细胞直接离心，转速1200rpm或250g，时间3min）
步骤3：用配制好的冻存液重悬细胞，按照1~1.5mL/管分装到冻存管中，拧紧管盖，做好标记
步骤4：冻存管放入冻存盒，冻存盒放入-80℃冰箱过夜（24h）
步骤5：冻存管从冻存盒取出，转移至液氮长期保存
方法二：使用无血清非程序冻存液
无血清非程序冻存液是一种商品化的冻存液，无需自己配制，无需降温盒，大大提升了便捷性。
但是，并非所有细胞都适用于这种冻存液，使用前必须做冻存测试，没问题后再批量应用。
