小结二抗选择参考点

二抗的种属来源一般来说，不同的种属来源与二抗的质量没有必然的联系，来源于山羊的二抗与来源于驴的二抗在一般的实验里没有太多的差别。然而在一些特殊的实验里，如双标实验里，如果其中一个一抗是山羊来源的，一个是小鼠来源的，则相应的二抗分别要抗山羊和抗小鼠的二抗，此时二抗就不能选山羊或者小鼠来源的。选择相应的驴来源的二抗，就非常适合做类似双标的免yi实验。双标得2个都抗才行，故选择第3个种源的抗体。

1. 选择哪种形式的二抗，是整个IgG分子，Fab片段，还是F(ab')2片段？整个IgG分子：此种抗体适用于多数情况。Fab片段：它们只有一个结合位点，一般用来封闭内源性免yi球蛋白。F(ab')2片段：该种抗体是由两个靠二硫键连接的用于结合抗原的Fab片段组成，这些抗体用在特定的情况中，如需要避免抗体与具有Fc受体的细胞结合的情况。

2. 二抗的偶联标记一般来讲，偶联到二抗上的探针主要有酶（辣根过氧化酶HRP和碱性磷酸酶AP或其衍生物APAAP，PAP），荧光基团（FITC,  RRX, TR, PE）和生物素。选用哪种探针的二抗主要取决于具体的实验。对于western blot和ELISA，常用的二抗是酶标二抗，而细胞或组织标记实验（组织免yi化学，细胞免yi化学，流式细胞术）中通常使用荧光基团标记的二抗，免yi组化中也可以使用辣根过氧化酶或碱性磷酸酶标记的二抗。

3. 抗体的纯度亲和层析纯化的抗体一般更受欢迎，因为这些产品的纯度更高，产生的非特异性背景也少。但是有些情况下也要考虑到纯化过程中损失的IgG部分，因为其中含有亲和力高的抗体，尤其是当目的抗原存在的量较小的时候。