制作划痕实验需要注意事项

      伤口愈 合试验，也通常称为“划痕试验”，是一种广泛建立的研究体外集体细胞迁移的技术。细胞划痕（Wound Healing)是一种操作简单，经济实惠的研究细胞迁移/肿瘤侵袭的体外试验方法。其实验原理是，当细胞长到融合成单层状态时，在融合的单层细胞上人为**一个空白区域，称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈 合。

     条件好的实验室可以使用活细胞成像来分析创伤愈 合实验中角质形成细胞或者成纤维细胞的迁移活动。结合包含的软件分析算法，有可能延迟量化间隙表面关闭和关闭推移时间的速度。使用延时显微镜获取数据的优点是，可以在恒温箱内确定和稳定的条件下记录伤口分析。

     通常，用于伤口愈 合试验的细胞类型旨在重建表皮的再生特征。永生化的细胞系和原代细胞经常被用作这方面的模型。常用的细胞类型是角质形成细胞和成纤维细胞。

 那么制作划痕实验需要注意事项：

1. 细胞的密度；划痕实验一般是几种细胞的结合，但是每种细胞的生长速度会不一样，所以需要按照细胞的生长特性调整培养时间，细胞铺满孔底时划痕的效果会比较好，建议是的铺满。

2. 用枪头画线时尽量垂直，以6孔板为例 ，一个孔可以画6条线。

3. 画线之后一定要用PBS洗两次，以去除划下的细胞。

4. 注意培养方式一定要改成无血清或者低血清的培养基，因为：划痕后用无血清培养基培养细胞，意在说明在监测的 24 小时内，划痕的缩小是细胞 迁移作用的结果，所以要将细胞增殖造成细胞迁移的影响降到低；但若细胞改成无血清培养后大面积漂浮，需要适量加入血清浓度不能高于2%。

5. 放入37℃ 5% CO2培养箱，培养。可按0，10，12，15时间点取样，拍照(具体时间依实验需要而定)。

6. 统计方法：使用Image J软件打开图片后，抓取自己画的线条，计算细胞间距离的平均值。