PCR整个基本反应步骤

PCR的原理：PCR的基本过程类似于DNA的天然复制，特异性依赖于与靶序列两端互补的Oligo引物。整个过程由变性-退火-延伸3个基本反应步骤构成：

1，模板DNA变性：模板或经PCR扩增形成的DNA经加热至94℃左右一定时间后，双链之间氢键断裂，双股螺旋解链，变成两条单链，以便它与引物结合，为下一轮反应做准备。

2，模板DNA与引物的退火（复性）：DNA加热变性成单链后，当温度降至一定程度（55℃左右）时，引物即与模板DNA单链的互补序列配对结合。

3，引物的延伸（72℃）：在Taq DNA聚合酶的作用下，DNA模板上的引物以dNTP为原料，按A-T、C-G碱基配对与半保留复制原则，合成一条新的与模板DNA链互补的链。

重复上述 变性-退火-延伸 的循环过程，每一循环获得的“半保留复制链”都可成为下次循环的模板。通常每完成一个循环需时为2~4min，2~3h就能将靶核酸扩增放大上亿倍（30个循环时，靶产物数量约为10亿）。（注：PCR的第1和第2个循环，并没有短的目的片段，只是在第3个循环后才有，并且有部分双链的长片段将始终伴随整个扩增过程）