ELISA实验洗板必看事项

    洗板目的在于将特异性结合于固相上的抗原(抗体)与温育过程中吸附的非特异性成份分离，使免yi 复合物与待测抗体(抗原)呈一定比例，洗板是否合格直接影响检测结果的准确性。洗板应严格按照说明控制洗板时间及洗板次数， ELISA 检测一般用洗涤液洗板 3 次，洗涤液应严格按照操作说明进行稀释，洗液应注满每个微孔并注意洗液不外溢，垂直甩板避免交叉污染，防止出现假阴性及假阳性结果。使用洗板机洗板可一定程度上避免环境污染、提高工作效率，洗涤开始时注意观察每根吸液针是否一直插入孔底并吸干孔内全部液体，严格按照要求设置一定的洗板时间及洗板次数。洗板过程中注意冲力大小，避免冲力过大导致酶结合物丢失，吸光度值偏低。洗液应根据不同厂家的酶标板调整注水量，注意不要溢出孔外；稀释洗液所用的蒸馏水或去离子水酸碱度适中，使配出的洗液 pH 在 7.2~7.6 范围内，用非金属容器保存，保持液体新鲜无污染、沉淀。洗板结束后将板拍干，应垂直扣在备好的干净的吸水纸或毛巾上，且注意每次更新干净的吸水纸或毛巾。

洗板时还应注意以下问题：

(1) 需每天校正注液量及残液量，洗涤后残液量不得大于 2μl；

(2)及时更换破损吸液针，避免破坏底板包被；

(3)针对不同厂家酶标板注意调整吸液头下降高度，避免冲洗针头卡住酶标板；

(4)注意调整洗液量，洗液量过多将溢出，过少将达不到洗涤效果；

(5)关机前使用蒸馏水冲洗管道，避免洗液的结晶物堵塞管道；

(6) 不同种试剂盒的洗液严禁混合使用。临床操作中，工作人员由于担心洗板次数过少达不到去除非特异性物质的理想效果而增加洗板次数，zui 近研究发现，随着洗板次数的增加样本检测的 OD 值降低，造成假阴性结果及灰区标本的漏检。