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细胞稳转株构建病毒法步骤
日期：2024-11-07 16:30
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摘要：
细胞稳转株构建病毒法步骤：
1、确定目标细胞系的相关信息，细胞的培养条件，细胞的增值速度，支原体污染情况；
2、 预实验确定MOI值，可通过查阅文献确定慢病毒在目标细胞系中的MOI值也可参考查阅得到的数据，设计梯度实验，摸索合适MOI；
3、 预实验确定筛选药 物用量，常用的药 物筛选有：puro、G418、潮霉素等；
4、 细胞铺板，将需要的细胞量接种于合适的培养皿中；
5、 细胞感染，通过接种的细胞量及预实验得来的MOI来计算添加的病毒体积；
6、 撤病毒，第2天，一般不超过24h换...
细胞稳转株构建病毒法步骤：
1、确定目标细胞系的相关信息，细胞的培养条件，细胞的增值速度，支原体污染情况；
2、 预实验确定MOI值，可通过查阅文献确定慢病毒在目标细胞系中的MOI值也可参考查阅得到的数据，设计梯度实验，摸索合适MOI；
3、 预实验确定筛选药 物用量，常用的药 物筛选有：puro、G418、潮霉素等；
4、 细胞铺板，将需要的细胞量接种于合适的培养皿中；
5、 细胞感染，通过接种的细胞量及预实验得来的MOI来计算添加的病毒体积；
6、 撤病毒，第2天，一般不超过24h换液；
7、 转染48h后选择对应的抗性 药 物进行筛选；
8、 筛选结束后进行单克隆化，选择阳性克隆进行培养。