产品名称：AP13人Apelin人13蛋白elisa试剂盒说明书

操作流程：
（1）待测样品孔中每孔加入待测样品100μl，每种样品设3个平行孔；设两个阴性对照孔，每孔加未处理组的细胞裂解液100μl；另设一个空白对照孔，加入纯细胞裂解液100μl。 
（2）酶标板置4℃，包被过夜。
（3）洗板：吸干孔内反应液，用洗涤液过洗一遍（将洗涤液注满板孔后，即甩去），之后将洗涤液注满板孔，浸泡1-2分钟，间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
（4）阴性对照孔每孔加入PBS 50μl，样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。 
（5）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。 
（6）洗板，同（4）。 
（7）每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。 
（8）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。 
（9）洗板，同（4）。 
（10）每孔加TMB显色液 100μl，轻轻混匀10s，置37℃暗处反应15-20min。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。 
（12）分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，终测得的OD值为两者之差（W1-W2），以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
（13）数据处理：在得出标本（S）和阴性对照（N）的 OD值后，计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。

优势特点：产品仅用于科研
1.高效、灵敏、特异的抗体；
2.稳定的重复性和可靠性；
3.吸附性能好，空白值低，孔低透明度高的固相载体；
4.使用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养液、尿液、唾液等等多种标本类型；
5.节省实验经费。 

组成及试剂配制 :
1. 酶联板：一块(96孔) 
2. 标准品(冻干品)：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为100 ng/ml，做系列倍比稀释(注：不要直接在板中进行倍比稀释)后，分别稀释成100 ng/ml，50 ng/ml，25 ng/ml，12.5 ng/ml，6.25 ng/ml，3.12 ng/ml，1.56 ng/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 ng/ml，临用前15分钟内配制。
如配制50 ng/ml标准品：取0.5ml (不要少于0.5ml ) 100 ng/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3. 样品稀释液：1×20ml/瓶。
4. 检测稀释液A：1×10ml/瓶。
5. 检测稀释液B：1×10ml/瓶。
6. 检测溶液A：1×120ul/瓶(1:100)临用前以检测稀释液A 1:100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(100ul/孔)，实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10ul检测溶液A加990ul检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
7. 检测溶液B：1×120ul/瓶(1:100)临用前以检测稀释液B 1:100稀释。稀释方法同检测溶液A。
8. 底物溶液：1×10ml/瓶。 
9. 浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 
10. 终止液：1×10ml/瓶(2N H2SO4)。

样本实验前准备：
ELISA试剂盒液体样本：包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。
（1）血清
室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
（2）血浆：
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
（3）尿液：
用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
（4）细胞培养上清：
检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。
（5）培养细胞
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
（6）组织标本
切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
三苯双脒（标准品）  tribendimidine  质量规格：UV法含量测定 小鼠胚胎干细胞系MESPU30(M30)ELISA检测试剂盒MouseEmbryonicStemMESPU30,M30ELISAKit 96T/48T

焦地黄苯乙醇甙B1（标准品）  Jionoside B1  质量规格：HPLC≥98%,标准品 小鼠胚胎干细胞系MESPU30(M30)ELISA试剂盒 ，英文名： M30 ELISA Kit

N-6022  N6022  质量规格：>98%,GSNOR抑制剂 小鼠皮肤桥蛋白(DPT)ELISA试剂盒 ，英文名： DPT ELISA Kit

巴柳氮钠（标准品）  Balsalazide  质量规格：含量测定 小鼠皮质醇(Coisol)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

依帕司他（标准品）  Epalrestat   质量规格：UV法含量测定 小鼠皮质醇(Coisol)ELISA试剂盒 ，英文名： Coisol ELISA Kit

奥沙拉秦钠  Olsalazine di  质量规格：>98%,BR 小鼠皮质醇结合球蛋白(CBG)ELISA试剂盒 ，英文名： CBG ELISA Kit

奥沙拉秦钠(标准品)  Olsalazine di  质量规格：含量测定 小鼠皮质酮(CO)ELISA试剂盒 ，英文名： CO ELISA Kit

盐酸吡格列酮（标准品）  Pioditazone   质量规格：含量测定 小鼠皮质酮/肾上腺酮(CO)ELISA检测试剂盒MouseCoicosterone,COELISAKit 96T/48T

去氧氟尿苷（标准品）  Doxifluridine/5-Fluoro-5′-deoxyuridine  质量规格：HPLC法含量测定 小鼠皮质酮/肾上腺酮(CO)ELISA试剂盒 ，英文名： CO ELISA Kit

普罗胺（标准品）  Iopromide  质量规格：检查用 小鼠嘌呤核苷酸0酸化酶(PNP)ELISA试剂盒 ，英文名： PNP ELISA Kit
HEF细胞，人胚纤维细胞系 奇异变形杆菌 中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO-DUKXB11-TGF-β Dinding Protein cDNA羧酸左乙拉西坦Levetiracetam Carboxylic Acid质量规格：美国进口

CXCL12 Protein Mouse 重组小鼠 CXCL12 / SDF-1 蛋白林可霉素(U-10149A)Lincomycin (U-10149A)质量规格：美国进口

Neuro-2a/N2a(小鼠脑神经瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 中东呼吸综合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein fragme (aa 367-606) 杆状病-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 洛美沙星天冬氨酸盐Lomefloxacin, Aspartate质量规格：美国进口

小鼠诱导性多潜能干细胞;PUMC-mips-A2洛伐他汀羟基酸钠盐Lovastatin Hydroxy Acid,  Salt质量规格：美国进口

IL17RA Others Rat 大鼠 IL17RA / IL17R 人细胞裂解液 (阳性对照) 醋酸甲地孕酮-d3Megestrol Acetate-d3质量规格：美国进口
Desglucohellebrin  20300-44-1  中文名：  分子式：C30H42O10    Humanai-deoxyribonucleaseB,ai-DNaseBELISAKit 人抗DNA酶B抗体(ai-DNaseB)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

Polypodine B  18069-14-2  中文名：水龙骨甾酮B  分子式：C27H44O8    humanEchoVirusIgM,ECHOIgMELISA试剂盒人艾柯病IgM(ECHOIgM)ELISA试剂盒规格：96T/48T

14β,16β-Dihydroxy-3β-(β-D-glucopyranosyloxy)-5α-bufa-20,22-dienolide  1323952-04-0  中文名：  分子式：C30H44O10    组织PDGFRα激酶活性定量检测试剂盒(A/B/C)20次

Withanolide S  63139-16-2  中文名：醉茄内酯S  分子式：C28H40O8    HumanPeptidylprolylcis/ansisomerase,PPIELISAKit人肽基脯氨酰顺反异构酶(PPI)ELISA试剂盒规格：96T/48T

Ergosterol glucoside  130155-33-8  中文名：麦角甾醇葡萄糖苷  分子式：C34H54O6    兔子可溶性细胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
注意事项：
1． 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2． 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3． 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值大于标准品孔孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6． 底物请避光保存。
7． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8． 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9． 本试剂不同批号组分不得混用。

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