产品名称：AFF1人AF4/FMR2家族成员1elisa试剂盒说明书

操作流程：
（1）待测样品孔中每孔加入待测样品100μl，每种样品设3个平行孔；设两个阴性对照孔，每孔加未处理组的细胞裂解液100μl；另设一个空白对照孔，加入纯细胞裂解液100μl。 
（2）酶标板置4℃，包被过夜。
（3）洗板：吸干孔内反应液，用洗涤液过洗一遍（将洗涤液注满板孔后，即甩去），之后将洗涤液注满板孔，浸泡1-2分钟，间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
（4）阴性对照孔每孔加入PBS 50μl，样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。 
（5）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。 
（6）洗板，同（4）。 
（7）每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。 
（8）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。 
（9）洗板，同（4）。 
（10）每孔加TMB显色液 100μl，轻轻混匀10s，置37℃暗处反应15-20min。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。 
（12）分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，终测得的OD值为两者之差（W1-W2），以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
（13）数据处理：在得出标本（S）和阴性对照（N）的 OD值后，计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。

优势特点：产品仅用于科研
1.高效、灵敏、特异的抗体；
2.稳定的重复性和可靠性；
3.吸附性能好，空白值低，孔低透明度高的固相载体；
4.使用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养液、尿液、唾液等等多种标本类型；
5.节省实验经费。 

组成及试剂配制 :
1. 酶联板：一块(96孔) 
2. 标准品(冻干品)：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为100 ng/ml，做系列倍比稀释(注：不要直接在板中进行倍比稀释)后，分别稀释成100 ng/ml，50 ng/ml，25 ng/ml，12.5 ng/ml，6.25 ng/ml，3.12 ng/ml，1.56 ng/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 ng/ml，临用前15分钟内配制。
如配制50 ng/ml标准品：取0.5ml (不要少于0.5ml ) 100 ng/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3. 样品稀释液：1×20ml/瓶。
4. 检测稀释液A：1×10ml/瓶。
5. 检测稀释液B：1×10ml/瓶。
6. 检测溶液A：1×120ul/瓶(1:100)临用前以检测稀释液A 1:100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(100ul/孔)，实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10ul检测溶液A加990ul检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。
7. 检测溶液B：1×120ul/瓶(1:100)临用前以检测稀释液B 1:100稀释。稀释方法同检测溶液A。
8. 底物溶液：1×10ml/瓶。 
9. 浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 
10. 终止液：1×10ml/瓶(2N H2SO4)。

样本实验前准备：
ELISA试剂盒液体样本：包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。
（1）血清
室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
（2）血浆：
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
（3）尿液：
用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
（4）细胞培养上清：
检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。
（5）培养细胞
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
（6）组织标本
切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
升麻素（标准品）  Cimifugin  质量规格：HPLC≥98%，标准品 小鼠基质金属蛋白酶13(MMP-13)ELISA试剂盒 ，英文名： MMP-13 ELISA Kit

升麻素苷（标准品）  Prim-O-glucosylcimifugin  质量规格：HPLC≥98%，标准品 小鼠基质金属蛋白酶14(MMP14)ELISA试剂盒 ，英文名： MMP14 ELISA Kit

升麻酮醇-3-O-α-L-拉伯糖苷（标准品）  Cimigenol-3-O-α-L-arabinoside  质量规格：HPLC≥98%，标准品 小鼠基质金属蛋白酶15(MMP15)ELISA试剂盒 ，英文名： MMP15 ELISA Kit

圣草苷（标准品）  Eriocitrin  质量规格：HPLC≥98%，标准品 小鼠基质金属蛋白酶19(MMP19)ELISA试剂盒 ，英文名： MMP19 ELISA Kit

圣草酚(标准品）  Eriodictyol  质量规格：HPLC≥98%，标准品 小鼠基质金属蛋白酶2(MMP2)ELISA试剂盒 ，英文名： MMP2 ELISA Kit

石斛碱（标准品）  Dendrobine  质量规格：HPLC≥97%，标准品 小鼠基质金属蛋白酶2/明胶酶A(MMP-2/Gelatinase A)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

石榴皮鞣素（标准品）  Punicalin  质量规格：HPLC≥98%，标准品 小鼠基质金属蛋白酶2/明胶酶A(MMP-2/Gelatinase A)ELISA试剂盒 ，英文名： MMP-2/Gelatinase A ELISA Kit

石杉碱甲（标准品）  (−)-Huperzine A  质量规格：HPLC≥98%，标准品 小鼠基质金属蛋白酶2/明胶酶A(MMP-2/GelatinaseA)ELISA检测试剂盒Mousemaixmetalloproteinase2/GelatinaseA,MMP-2ELISAkit 96T/48T

矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(标准品）  Cyanidin-3-O-glucoside chloride  质量规格：HPLC≥98%，标准品 小鼠基质金属蛋白酶23B(MMP23B)ELISA试剂盒 ，英文名： MMP23B ELISA Kit

红花甙; 红花黄色素  Carthamine;Safflower Yellow  质量规格：色价E(1%)=150;红花黄色素含量>95% 小鼠基质金属蛋白酶3(MMP-3)ELISA检测试剂盒Mousemaixmetalloproteinase3,MMP-3ELISAkit 96T/48T
HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/VietNam/1203/2004) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人细胞裂解液 (阳性对照) 酞菁铜(II)(β-型)(>90.0%(T))Copper(II) Phthalocyanine (β-form)质量规格：>90.0%(T)

小鼠子细胞;U14三(1,3-二苯基-1,3-丙二酮基)(1,10-邻二氮杂菲)铕(Ⅲ)(>95.0%(T))Tris(1,3-diphenyl-1,3-propanedionato)(1,10-phenanthroline)europium(III)质量规格：>95.0%(T)

METAP2 Others Mouse 小鼠 METAP2 / MAP2 杆状病-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 3-(2-苯并噻唑基)-7-(二乙氨基)(>98.0%(HPLC)(T))3-(2-Benzothiazolyl)-7-(diethylamino)coumarin质量规格：>98.0%(HPLC)(T)

CM-M001小鼠肺微血管内皮细胞完全培养基100mL 3-(2-苯并咪唑基)-7-(二乙氨基)(>98.0%(T))3-(2-Benzimidazolyl)-7-(diethylamino)coumarin质量规格：>98.0%(T)

Hela, 人细胞系 小鼠成纤维细胞,3T3TK细胞 SPA-A1(肺腺癌细胞)4,4'-双(5-甲基-2-苯并恶唑基)芪(升华提)(>96.0%(HPLC))4,4'-Bis(5-methyl-2-benzoxazolyl)stilbene (purified by sublimation)质量规格：>96.0%(HPLC)
2-Chloro-1-(5'-(prop-1-ynyl)-2,2'-bithiophen-5-yl)ethanol  114916-00-6  中文名：  分子式：C13H11ClOS2    组织NADPH细胞色素C还原酶(NADPHCytochromeCReductase)活性高质敏感比色法定量检测试剂盒20次

Arctinol B  102054-39-7  中文名：  分子式：C13H12O2S2    humanphospho-inhibitorysubunitofNF-κBα,pIKBαELISAKit人0酸化核因子κB抑制蛋白α(pIKBα)ELISA试剂盒规格：96T/48T

Fumaric acid  110-17-8  中文名：  分子式：C4H4O4    兔子葡萄糖氧化酶(GOD)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

Shikimic acid  138-59-0  中文名：莽草酸  分子式：C7H10O5    Rat thromboxane B2 (TXB2) ELISA Kit 大鼠血栓素B2(TXB2)ELISA试剂盒

Echinoynethiophene A  64165-98-6  中文名：  分子式：C13H10O2S    Humanneuophilelastase,NEELISAKit 人中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
注意事项：
1． 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2． 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3． 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD 值大于标准品孔孔的OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6． 底物请避光保存。
7． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8． 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9． 本试剂不同批号组分不得混用。

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