| 产品名称 |
4T1+luc细胞 |
| 规格 | 详见说明书 |
| 货号 |
BH-8010746 |
细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括。
①细胞核、染色体以及基因表达的研究。
②生物膜与细胞器的研究。
③细胞骨架体系的研究。
④细胞增殖及其调控。
⑤细胞分化及其调控。
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)。
⑦细胞的起源与进化。
⑧细胞工程。
实验报告：
一、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、荧光鉴定：
1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
培养操作：
1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
AIM2 英文名称： 干扰素诱导蛋白AIM2抗体 0.1ml
Aquaporine 2 英文名称： 水通道蛋白-2抗体 0.1ml
ABI2 英文名称： 肿瘤抑制基因ABI2/精氨酸酪氨酸蛋白激酶结合蛋白抗体 0.1ml
ARL11 英文名称： ADP核糖基化因子样11抗体 0.2ml
ARMCX3 英文名称： ARM重复X连锁蛋白ARMCX3抗体 0.2ml
ARMCX1 英文名称： ARM重复X连锁蛋白ARMCX1抗体 0.2ml
ARMCX2 英文名称： ARM重复X连锁蛋白ARMCX2抗体 0.2ml
Apg10 英文名称： 自噬相关蛋白10抗体 0.2ml
ACBD6 英文名称： 酰基辅酶A结合结构域蛋白6抗体 0.2ml
Aminoacylase 1 英文名称： 氨基酰化酶1抗体 0.2ml
Adipose Triglyceride Lipase 英文名称： 脂肪甘油三酯脂酶抗体 0.1ml
phospho-AMPK alpha-1 (Thr172) 英文名称： 磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶α1抗体 0.1ml
Amphiregulin 英文名称： 双调蛋白（结肠直肠细胞源性生长因子）抗体 0.1ml
phospho-AQP2(Ser264) 英文名称： 磷酸化水通道蛋白2抗体 0.1ml
AXL 英文名称： 粘附相关激酶抗体 0.1ml
phospho-AXL (Tyr698+Tyr702+Tyr703) 英文名称： 磷酸化粘附相关激酶抗体 0.1ml
phospho-AKT1 + AKT2 + AKT3 (Thr308+Thr309+Thr305) 英文名称： 磷酸化蛋白激酶B抗体 0.1ml
D-天冬氨酸
英文名称：D-Aspartic acid；(R)-Aminosuccinic acid；(R)-2-Aminosuccinic acid；D-Asparaginic Acid；H-D-Asp-OH
其他名称：D-天门冬氨酸；D-天冬酸；D(-)氨基丁二酸；D(-)氨基琥珀酸；二胺基丁二酸
CAS号：1783-96-6
C4H7NO4=133.10
级别：BR
含量：≥99.0%
比旋光度：-24～-26º
PH：2.5～3.5
氯化物：≤0.02%
铵盐：≤0.02%
铁盐：≤10ppm
砷盐：≤1ppm
重金属：≤10ppm
干燥失重：≤0.1%
性状(以下信息仅供参考)：白色结晶粉末。溶于热水和稀盐酸，微溶于冷水，不溶于乙醇和乙迷。相对密度(d1313)1.6613
用途：本品仅供科研，不得用于其它用途
保存：RT
DL-天冬氨酸
英文名称：DL-Aspartic acid；(±)-2-Aminosuccinic acid；DL-2-Aminobutanedioic acid；DL-Aminosuccinic acid；DL-2-Aminobutanedioic acid；DL-Aminosuccinic acid
其他名称：DL-天门冬氨酸；DL-天门酸；DL-氨基琥珀酸；DL-2-氨基丁二酸；DL-天冬酸；DL-氨基丁二酸
CAS号：617-45-8
C4H7NO4=133.10
级别：BR
含量：≥99.0%
鉴别：合格
PH：2.7～3.3
干燥失重：≤0.20%
硫璜灰：≤0.10%
铵盐：≤100ppm
氯化物：≤100ppm
硫酸盐：≤200ppm
重金属：≤10ppm
砷盐：≤1ppm
铁盐：≤3ppm
天冬酰胺酸：≤0.10%
4T1+luc细胞氮含量：10.4～10.6%
性状(以下信息仅供参考)：白色结晶粉末。微溶于水，不溶于乙醇及乙迷。相对密度(d12.512.5) 1.6632。熔点338～339℃(278～280℃)
用途：本品仅供科研，不得用于其它用途。微生物培养基
保存：RT
细胞培养的优点：1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备 记录方式可采用摄影照片、缩时电影、电视等多种手段。
5.研究的范围比较广泛
应用的学科领域较为宽广，如细胞学、肿瘤学、生物化学、遗传学、分子生物学等；
适用的对象范围广，从低等动物到高等动物，一种动物的不同年龄阶段以及不同组织，都可进行有针对性的研究。
6.研究的费用相对较经济
可提供大量、同一时期、重复性好的、生物学性状相似的实验对象。