产品名称：HUH-5细胞

细胞生物学研究有以下几个方面。产品仅用于科学研究
细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括。
①细胞核、染色体以及基因表达的研究。
②生物膜与细胞器的研究。
③细胞骨架体系的研究。
④细胞增殖及其调控。
⑤细胞分化及其调控。
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)。
⑦细胞的起源与进化。
⑧细胞工程。

实验报告：
一、分离与培养：
    1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；
    2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
    3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
    4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
    5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、荧光鉴定：
    1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
    2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
    3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
    4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
    5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
    6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

培养操作：
1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。      
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。 
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
24种偶氮染料混标，10ml 标准品 PCBNo.24  10ng/ul于乙腈，10ml 特征形态 液态

Pesticide-Mix 192 标准品 PCBNo.23  溶,10ML 特征形态 液态

Azodyes-Mix 3,10ng/ul 标准品 PCBNo.22  10ng/ul于乙腈,10ml 特征形态 液态
(D-Phe4)-FMRFamide  Ac-F-Nle-RF-NH2  Fmoc-GV-OH  GRGETP  (Phe1376)-Fibronectin Fragment (1371-1382)

(D-Met2)-FMRFamide  ACEP-1  Fmoc-GP-Hyp-OH  GRGESP  Fibronectin Fragment (196-203)

(D-Phe1)-FMRFamide  Fmoc-YA-OH  Fmoc-GF-OH  GRGES  c(RADfK)

Molluscan Cardioexcitatory Neuropeptide  Fmoc-WP-OH  Fmoc-GGG-OH  GRGDTP  Fibronectin CS-1Fragment (1978-1985)

FLRFamide  Fmoc-PPPPP-OH  Fmoc-AA-OH  GRGDSPK  Fibronectin CS-1Fragment (1978-1982)
油酸（标准品）   Oleic acid  质量规格：分析标准品,≥99.0%(GC) 牛窖蛋白Caveolin-1(CAV1)试剂盒 Bovine Caveolin-1,CAV1 ELISA kit

反式-9-十八烯酸甲酯（标准品）  trans-9-Octadecenoic methyl ester  质量规格：分析标准品 牛结合珠蛋白/触珠蛋白(Hpt/HP)ELISA检测试剂盒BovineHaptoglobin,Hpt/HPELISAKIT 96T/48T

对位红（标准品）   Para Red  质量规格：分析标准品,用于食品分析 牛结合珠蛋白/触珠蛋白(Hpt/HP)试剂盒 Bovine Haptoglobin,Hpt/HP ELISA KIT

岩芹酸（标准品）  Petroselinic acid  质量规格：分析标准品,>99%(GC) 牛结核杆菌(MTB)抗体(IgG)试剂盒 Bovine mycobecterium tuberculosis(MTB)aibody IgG ELISA Kit

D-泛醇（标准品）  D-Panthenol  质量规格：分析标准品 牛结核杆菌(MTB)抗体(IgM)试剂盒 Bovine mycobecterium tuberculosis(MTB)aibody IgM ELISA kit

糖精钠标准溶液（1.00mg/mL,基体：水）  Saccharin  salt solution  质量规格：1.00mg/mL,基体：水 牛金属硫蛋白(MT)ELISA检测试剂盒BovineMetallothionein,MTELISAKit 96T/48T

桃醛（标准品）  γ-Undecanolactone  质量规格：0.96 牛金属硫蛋白(MT)试剂盒 Bovine Metallothionein,MT ELISA Kit

甲基壬基甲酮（标准品）  2-Undecanone  质量规格：分析标准品 牛可溶性CD8(sCD8)试剂盒 Bovine soluble cluster of differeiation 8,sCD8 ELISA Kit

2′-脱氧胞苷 盐酸盐  2′-Deoxycytidine   质量规格：0.99 牛可溶性CD86(B7-2/sCD86)试剂盒 Bovine soluble Cluster of differeiation 86,sCD86 ELISA Kit

氢二铵  Ammonium phosphatedi basic  质量规格：SP 牛口蹄疫(FMDV)抗体(IgM)试剂盒 Bovine aibody against Foot and Moh Disease(FMDV)IgM ELISA Kit
细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备  记录方式可采用摄影照片、缩时电影、电视等多种手段。
5.HUH-5细胞研究的范围比较广泛
应用的学科领域较为宽广，如细胞学、肿瘤学、生物化学、遗传学、分子生物学等； 
适用的对象范围广，从低等动物到高等动物，一种动物的不同年龄阶段以及不同组织，都可进行有针对性的研究。
6.研究的费用相对较经济
可提供大量、同一时期、重复性好的、生物学性状相似的实验对象。