细胞培养的优点:
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备 记录方式可采用摄影照片、缩时电影、电视等多种手段。
5.研究的范围比较广泛
应用的学科领域较为宽广,如细胞学、肿瘤学、生物化学、遗传学、分子生物学等;
适用的对象范围广,从低等动物到高等动物,一种动物的不同年龄阶段以及不同组织,都可进行有针对性的研究。
6.研究的费用相对较经济
可提供大量、同一时期、重复性好的、生物学性状相似的实验对象。
产品名称 |
J.gamma1细胞 |
规格 |
详见说明书 |
货号 |
BH-8010788 |
细胞生物学研究有以下几个方面。产品仅用于科学研究
细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括。
①细胞核、染色体以及基因表达的研究。
②生物膜与细胞器的研究。
③细胞骨架体系的研究。
④细胞增殖及其调控。
⑤细胞分化及其调控。
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)。
⑦细胞的起源与进化。
⑧细胞工程。
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织完全被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
培养操作:
1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。天换液并 检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM
EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加 入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
2H,2H-全氟辛酸 标准品 Piperazinecitrate 53826-12-3纯品型,10mg 特征形态 固态
1h,1h,2h,2h全氟辛烷磺酸 标准品 SolventRed26 27619-97-2 纯品型,10mg 特征形态 固态
全氟辛烷磺酸钾(PFOS钾盐) 标准品 Phenazine 2795-39-3 纯品型,0.1g 特征形态 固态
c(RGDfK)
RGDS (Glu1)-Fibrinopeptide B (Hyp474•477,Gln479)-cyclo-α -Fetoprotein
(471-479) (human
(D-Pen2,p-chloro-Phe4,D-Pen5)-Enkephalin
Cyclo(-RGDfC) RGDC Fibrinopeptide B (Hyp474•477)-α -Fetoprotein(471- 478)(human, lowland goril (3,5-Diiodo-Tyr1,D-Ala2,N-Me- Phe4,glycinol5)- Enkephalin
c(RADfV) RGD (Tyr0)-Fibrinopeptide A CV-2-Nal-M (D-Ala2)-Leu-Enkephalin amide
c(RADfC) RRGDME Fibrinopeptide A (human) H-Cys-4-Abz-Met-OH Leu-Enkephalin amide,α -Neoendorphin (1-5) amide
XJ735 Ac-DRGDS
GPGG Epidermal Mitosis Inhibiting
Pentapeptide Boc-Leu-Enkephalin
硬脂酸钠(>95%,BR)
stearate 质量规格:>95%,BR 寡核苷酸探针同位素法DNA斑点杂交完全试剂盒5
硫代硫酸钠无水(>98.5%,BC) thiosulfate anhydrous 质量规格:>98.5%,BC 寡核苷酸探针同位素法DNA南方杂交完全试剂盒5
Sulfo NHS LC Biotin Sulfo NHS LC Biotin 质量规格:BR 寡核苷酸探针同位素法RNA北方杂交完全试剂盒5
Sulfo NHS SS Biotin Sulfo NHS SS Biotin 质量规格:BR 光镜样品固着液(10%Formalin固着液)50毫升
四乙酰核糖(>98% (HPLC),BC) Tetraacetylribose 质量规格:>98% (HPLC),BC 胱蛋白酶抑制剂(CystatinC)定量检测试剂盒50
J.gamma1细胞酪氨酸脱羧酶 Tyrosine decarboxylase 质量规格:>0.1 U/mg,BC 果菜D-葡萄糖酸内脂比色法定量检测试剂盒20
维多利亚蓝 R Victoria blue R 质量规格:染料含量:>80%,BS 果菜D-葡萄糖酸盐比色法定量检测试剂盒20
α-酮戊二酸单钾盐(>98%,BR) α-Ketoglutaric acid potassium salt 质量规格:>98%,BR 果菜L-天门冬酰胺化学比色法定量检测试剂盒20
1-环己基二乙酸单酰胺(>98%,BR) 1,1-Cyclohexanediacetic acid monoamide 质量规格:>98%,BR 果菜L-天门冬酰胺酶偶联反应比色法定量检测试剂盒20
1,2-乙二硫醇(>98.5%,BR) 1,2-Ethanedithiol 质量规格:>98.5%,BR 果菜比色法定量检测试剂盒20