产品名称：PK15细胞

细胞生物学研究有以下几个方面。产品仅用于科学研究
细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括。
①细胞核、染色体以及基因表达的研究。
②生物膜与细胞器的研究。
③细胞骨架体系的研究。
④细胞增殖及其调控。
⑤细胞分化及其调控。
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)。
⑦细胞的起源与进化。
⑧细胞工程。

产品详细 猪肾细胞系；PK15
形态特性 上皮细胞样
生长特性 贴壁生长
特征特性 该细胞PCV阳性
培养条件 DMEM(高糖）+10%FBS
传代方法 1:2～1:4传代，每周换液2～3次
细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备  记录方式可采用摄影照片、缩时电影、电视等多种手段。
5.研究的范围比较广泛
应用的学科领域较为宽广，如细胞学、肿瘤学、生物化学、遗传学、分子生物学等； 
适用的对象范围广，从低等动物到高等动物，一种动物的不同年龄阶段以及不同组织，都可进行有针对性的研究。
6.研究的费用相对较经济
可提供大量、同一时期、重复性好的、生物学性状相似的实验对象。

实验报告：
一、分离与培养：
    1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，将组织剪成1mm3左右大小；
    2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
    3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；
    4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
    5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、荧光鉴定：
    1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
    2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
    3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
    4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
    5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；
    6、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

培养操作：
1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。      
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。 
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
小鼠白介素1α(IL-1α)ELISA试剂盒     Capecitabine-2',3'-cyclic carbonate  921769-65-5  中文名：卡培他滨  分子式：C16H20FN3O7 

小鼠白介素1α(IL-1α)ELISAKit     Bathophenanthroline 1662-01-7  中文名：红菲绕啉  分子式：C24H16N2 

小鼠白介素-1α   英文名称：    ierleukin-1α   规格：   48T/96T   英文缩写：   IL-1α
依诺沙星(水溶性）  Enoxacin  质量规格：依诺沙星含量≥60% RatCollageypeⅡ,ColⅡELISA试剂盒大鼠Ⅱ型胶原(ColⅡ)ELISA试剂盒规格：96T/48T

氧氟沙星  Ofloxacin  质量规格：>98.5%,BR,可用于细胞培养  小鼠肾损伤分子1(Kim-1)ELISA试剂盒 ，英文名： Kim-1 ELISA Kit

氧氟沙星（标准品）  Ofloxacin  质量规格：HPLC>98%,标准品 小鼠碱性成纤维细胞生长因子9(bFGF-9)ELISA检测试剂盒Mousebasicfibroblastgrowthfactor9,bFGF-9ELISAKit 96T/48T

阿巴卡韦    Abacavir  质量规格：>99%,BR 人刚地弓形虫(T.gondii)试剂盒 Human Toxoplasma Gondii,T.gondii ELISA Kit

阿巴卡韦 (标准品)  Abacavir  质量规格：>98%,标准品 Rathemeoxygenase2,HO-2ELISAKit大鼠血红素氧合酶2(HO-2)ELISA试剂盒规格：96T/48T

烟酰胺/尼克酰胺/维生素B3  Nicotinamide  质量规格：>99%,BR BJ5183钙转感受态5X100微升

维生素B3(标准品)  Nicotinamide  质量规格：HPLC≥99%,标准品 MouseIerleukin1,IL-1ELISA试剂盒小鼠白介素1(IL-1)ELISA试剂盒规格：96T/48T

醋酸环丙孕酮,醋酸环丙氯地孕酮  Cyproterone acetate  质量规格：>98%,BR 小鼠肾素前体(renin precursor)ELISA试剂盒 ，英文名： renin precursor ELISA Kit

醋酸环丙孕酮(标准品)  Cyproterone acetate  质量规格：含量测定 小鼠胶质细胞系来源的神经营养因子(GDNF)ELISA检测试剂盒Mouseglialcellline-derivedneuroophicfactor,GDNFELISAKIT 96T/48T

甲地孕酮  Megestrol base  质量规格：>98.5%,BR 人肝脂酶(HL)试剂盒 Human hepatic lipase,HL ELISA Kit
PCR反应试剂盒(00bp)   次4,5-Dimethoxy-cyanobenzocyclobutane3524

PK15细胞pfu DNA聚合酶   0U/5×0U4,5,6,7-Tetrahydrothieno [3,2,c]pyridine 287831

Real Taq DNA聚合酶   0U /5×0U 4,4'-Dimethoxytrityl chloride61564,4'-二甲氧基三苯基氯甲烷

Taq plus DNA聚合酶   0U/5×0U4,4'-Diaminodiphenylsulfone84,4'-二氨基二苯砜

M-MLV(RNase H-) 反转录酶 00U 4,4'-Cyclohexylidenebisphenol84354,4'-环亚己基双苯酚