产品名称：人食管成纤维细胞

公司所有产品均不得用于临床诊断，仅可用于工业或科研等非医疗目的。

产品规格：>5×105细胞数
包装规格：1ml冻存细胞悬液或T-25培养瓶

细胞介绍：

食管是咽和胃之间的消化管，哺乳动物的食管结构上由内向外分四层 :黏膜层、黏膜下层、肌层、外膜。成纤维细胞是疏松结缔组织的主要细胞成分，其中外膜主要都是成纤维细胞构成的疏松结缔组织，食管通过其与食管周围的器官相连。黏膜下层,为厚的疏松结缔组织构成,内部包含食管腺，可分泌粘液排入食管腔。
食管癌的发生中由正常成纤维细胞转化而来的活化的癌相关纤维母细胞是肿瘤间质微环境内的主要效应细胞，研究证实，包括食管癌在内的多种肿瘤组织内的癌相关纤维母细胞，与正常成纤维细胞相比，在形态结构、生长方式、增殖活性、运动能力等发面均发生了显著变化，并且能够分泌大量的促进肿瘤细胞增殖、血管新生的信号分子以介导上皮 -间质之间复杂的相互作用。

1)细胞来源于手术切除的正常食管组织。
2)细胞鉴定：纤维连接蛋白（Fibronectin）或波形蛋白（Vimentin）免yi荧光染色为阳性。
3)经鉴定细胞纯度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细jun、酵母和真jun。
5)细胞生长方式：成纤维样细胞，贴壁培养。

我们推荐使用 Delf原代成纤维细胞培养体系 作为体外培养的培养基。

操作步骤如下：

1、剪切组织：先将所取得的组织，用D-Hanks或Hanks液清洗，以去除表面血污，并用手术镊去除黏附的结缔组织等非培养所需组织。再次清洗后，用手术刀将组织切成若干小块，移入青霉素小瓶或小烧杯中，加入适量缓冲液，用弯头眼科剪，反复剪切组织，直到组织成糊状，约1mm3大小。静置片刻后，用吸管吸去上层液体，加入适当的缓冲液再清洗一次。
2、消化分离：消化分离的目的是将细小的组织块消化分离成细胞团或分散的单个细胞，以利于进一步的培养，常用的消化酶有胰蛋白酶和胶原酶。
3、培养：细胞悬液用计数板进行细胞计数。用培养液将细胞数调整为（2～5）×105 cells／ml，或实验所需密度，分装于培养瓶中，使细胞悬液的量以覆盖后略高于培养瓶底部为宜。置CO2培养箱内，5％CO2，37℃静置培养。一般3～5d，原代培养细胞可以黏附于瓶壁，并伸展开始生长，可补加原培养液量1／2的新培养液，继续培养2～3d后换液，一般7～14d可以长满瓶壁，进行传代。

视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。

注意事项：

1)原代培养的分离细胞在初次接触体外环境时，虽然被分散成单个细胞，但它们之间的互相影响还是存在的， 而且这种影响对细胞能否存活是非常重要的。在这些细胞之间能产生一些促生长的活性物质， 使细胞彼此互相促进存活和生长。如果接种的细胞密度过低， 细胞之间的促生长作用很小， 虽然营养物质很充足， 也很难使细胞适应从体内的组织环境到被分散后进入独立生存环境的变化过程。 如果接种的细胞密度过大，会导致营养物质供应不足， 代谢废物积累较快需要经常换液和传代。
2)原代培养时初始培养在组织分散和分离细胞时细胞可能会受到严重的损伤。适当增大原代培养接种的细胞密度， 给培养的细胞提供更多的类似于在体内时细胞之间的相互作用， 会极大提高原代培养的细胞在体外存活率。待细胞适应体外环境后进行传代培养时再以较低的密度接种和培养。
3)由于细胞之间的相互的内在联系被打破，分离细胞在体外培养时经历的生存环境改变很大，在体外存活和生长的难度相应增加。 对于贴壁依赖性细胞来说，尽快使接种的细胞贴壁，是决定培养能否成功的关键。可以在接种后先将培养瓶置培养箱内培养 3h 到 5h，由于细胞悬液中带有少量培养液， 细胞即可以维持存活， 又可以很快接触到培养瓶底壁， 是细胞迅速黏附于底物，待细胞贴壁后，再补足培养液继续培养。
3、分离细胞培养法—悬浮型细胞培养 。

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