产品名称：大鼠中耳上皮细胞

细胞介绍：

中耳由三个听骨（砧骨、锤骨和镫骨）、鼓膜和咽鼓管组成。中耳的功能是将声能从鼓膜转移到耳蜗。中耳上皮细胞 在中耳的稳态和不育中起着重要作用。与meepic相关的异常可导致中耳ji病的发展，如中耳炎和胆脂瘤。有证据表明上皮细胞增殖是胆脂瘤的根本原因。近的研究也表明，上皮细胞的异常增殖可能与中耳成纤维细胞产生的炎症因子有关。人meeepic是研究中耳ji病的一种有效的体外模型，可用于中耳炎和胆脂瘤zhi疗的新靶点。

公司所有产品均不得用于临床诊断，仅可用于工业或科研等非医疗目的。

细胞特性：

1) 细胞来源于实验动物的正常中耳组织。
2) 细胞鉴定：广谱角蛋白((Pan Cytokeratin)免yi荧光染色为阳性。
3) 经鉴定细胞纯度高于90%。
4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细jun、酵母和真jun。
5) 细胞生长方式：上皮样细胞，贴壁培养。

推荐使用 delf原代 上皮 细胞培养体系 作为该细胞的培养试剂。

操作步骤如下：

1、剪切组织：先将所取得的组织，用D-Hanks或Hanks液清洗，以去除表面血污，并用手术镊去除黏附的结缔组织等非培养所需组织。再次清洗后，用手术刀将组织切成若干小块，移入青霉素小瓶或小烧杯中，加入适量缓冲液，用弯头眼科剪，反复剪切组织，直到组织成糊状，约1mm3大小。静置片刻后，用吸管吸去上层液体，加入适当的缓冲液再清洗一次。
2、消化分离：消化分离的目的是将细小的组织块消化分离成细胞团或分散的单个细胞，以利于进一步的培养，常用的消化酶有胰蛋白酶和胶原酶。
3、培养：细胞悬液用计数板进行细胞计数。用培养液将细胞数调整为（2～5）×105 cells／ml，或实验所需密度，分装于培养瓶中，使细胞悬液的量以覆盖后略高于培养瓶底部为宜。置CO2培养箱内，5％CO2，37℃静置培养。一般3～5d，原代培养细胞可以黏附于瓶壁，并伸展开始生长，可补加原培养液量1／2的新培养液，继续培养2～3d后换液，一般7～14d可以长满瓶壁，进行传代。

视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。

注意事项：

1)原代培养的分离细胞在初次接触体外环境时，虽然被分散成单个细胞，但它们之间的互相影响还是存在的， 而且这种影响对细胞能否存活是非常重要的。在这些细胞之间能产生一些促生长的活性物质， 使细胞彼此互相促进存活和生长。如果接种的细胞密度过低， 细胞之间的促生长作用很小， 虽然营养物质很充足， 也很难使细胞适应从体内的组织环境到被分散后进入独立生存环境的变化过程。 如果接种的细胞密度过大，会导致营养物质供应不足， 代谢废物积累较快需要经常换液和传代。
2)原代培养时初始培养在组织分散和分离细胞时细胞可能会受到严重的损伤。适当增大原代培养接种的细胞密度， 给培养的细胞提供更多的类似于在体内时细胞之间的相互作用， 会极大提高原代培养的细胞在体外存活率。待细胞适应体外环境后进行传代培养时再以较低的密度接种和培养。
3)由于细胞之间的相互的内在联系被打破，分离细胞在体外培养时经历的生存环境改变很大，在体外存活和生长的难度相应增加。 对于贴壁依赖性细胞来说，尽快使接种的细胞贴壁，是决定培养能否成功的关键。可以在接种后先将培养瓶置培养箱内培养 3h 到 5h，由于细胞悬液中带有少量培养液， 细胞即可以维持存活， 又可以很快接触到培养瓶底壁， 是细胞迅速黏附于底物，待细胞贴壁后，再补足培养液继续培养。
3、分离细胞培养法—悬浮型细胞培养 。

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