抗体保存注意事项
1、加入甘油:对于大多数抗体,可加入50%的甘油来避免反复冻融。甘油在-20℃可降低冰点,但不建议加入甘油的抗体保存于-80℃,该温度已经超过了甘油的冰点;
2、 加蛋白保护剂:蛋白在高浓度时不易降解,正如有些抗体会加入BSA作为稳定剂的原因,同时加入蛋白也可减少抗体由于管壁吸附所造成的损失。但是如果抗体要用来标记的话,则不能加入蛋白稳定剂,因为这些稳定剂会和抗体一起竞争结合标记物。
3、加入叠氮化钠:为了防止微生物污染,经常选择加入叠氮化钠到抗体中(终浓度 0.02% (w/v))。但在下述情况中不能使用叠氮化钠:
抗体用于染色或处理活细胞,用于体内研究。叠氮化钠在抵抗微生物的同时,对其它大部分有机物也是有毒的,因为它阻断了线粒体的 细胞色素电子传递系统cytochrome electron transportsystem。
要偶联带有氨基的抗体。叠氮化钠会干扰任何含有氨基的偶联,因此在进行偶联之前,应将叠氮化钠去除。偶联后的抗体可以加入叠氮化钠保存,但是浓度只能是0.01%。对于需要偶联的抗体,硫柳汞 (merthiolate)可以替代叠氮化钠作为保护剂。
此外,如果需要去除叠氮化钠,可以通过凝胶电泳或过滤的方式(IgG 的分子量是 150kDa,叠氮化钠的分子量只有65Da),使用cut off 14kDa的滤膜即可将叠氮化钠从抗体中去除。